Штам бактерій enterobacter agglomerans ГИСК n 257, що володіє комплексом факторів патогенності

Винахід призначений для отримання термолабільного ентеротоксину (ЛТ-ентеротоксин) і анатоксину Enterobacter agglomerans при виробництві вакцин. Штам Enterobacter agglomerans N 5356 виділено з випорожнень хворого з мікозів стоп, депонований в колекції Державного науково-дослідного інституту стандартизації та контролю медичних біологічних препаратів ім. Л.А.Тарасевіча і має реєстраційний номер 257. Штам Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 характеризується наступними ознаками. При вирощуванні на звичайних поживних середовищах при 37 ° С штам на поверхні живильного середовища зростає з утворенням характерних ізольованих колоній з жовтуватим відтінком. При вирощуванні в бульйоні Хоттингера (рН 7,2) при 37 ° С протягом 24 год викликає помутніння з випаданням осаду. Субплантарное введення мишам вагою 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки більше 95 мг. Інтраназальне введення 0,05 мг 20-годинний бульонной культури викликає загибель 95% мишей-самців вагою 15-16 г протягом 4 год при явищах тонічнихсудом і асфіксії. Внутрішньошкірне введення 300 млн. Мікробних клітин 20-годинний бульонной культури викликає некроз шкіри кролика діаметром 30 см. Під час експерименту петля тонкої кишки кролика при введенні 500 млн. М.т. 20 годинний бульонной культури дає позитивний результат (V / L = 1,2). Гріти при 56 ° С протягом 45 хв центрифугат 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки мишей до 30 мг, не викликаючи некрозу шкіри кролика. Гріти при 100 ° С 20-годинна культура не викликає накопичення рідини в ізольованій петлі тонкого кишечника кролика (V / L = 0,3). Середовища для розмноження - бульйон Хоттингера (рН 7,2), що містить 5% еритроцитів кролика при 37 ° С протягом 24 год. Генетичні особливості: Нly +, Ent +, MS +, MR +. Стійкий до пеніциліну, тетрацикліну, еритроміцину, левоміцетину, карбеніцилін, рифампіцину, олеандоміцин. Штам Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 володіє підвищеною токсінпродуцірующей здатністю. 1 табл.

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання термолабільного ентеротоксину (ЛТ-ентеротоксин) і анатоксину Enterobacter agglomerans, при виробництві вакцин.

Технічним результатом є штам Enterobacter agglomerans N 5356, що володіє підвищеною токсінопродуцірующей здатністю.

Штам Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 характеризується наступними ознаками: Культуральні ознаки.

При вирощуванні на звичайних поживних середовищах при 37 o C штам на поверхні живильного середовища зростає з утворенням характерних ізольованих колоній з жовтуватим відтінком. При вирощуванні в бульйоні Хоттингера (рН 7,2), при 37 o C, протягом 24 год викликає помутніння з випаданням осаду.

Способи визначення активності ЛТ-ентеротоксину: Субплантарное введення мишам вагою 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки більше 95 мг (Аксьонова О.В. 1980 г.).

Інтраназальне введення 0,05 мг 20-годинний бульонной культури викликає загибель 95% мишей-самців вагою 15-16 г протягом 4 год при явищах тонічнихсудом і асфіксії (Войно-Ясенецького Н.К. 1967 г.).

Внутрішньошкірне введення 300 млн. Мікробних клітин 20-годинний бульонной культури викликає некроз шкіри кролика діаметром 3 см.

Під час експерименту петля тонкої кишки кролика при введенні 500 млн. М.т. 20-годинний бульонной культури дає позитивний результат (V / L = 1,2).

Гріти при 56 o C протягом 45 хв, центрифугат 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки мишей до 30 мг, не викликаючи некрозу шкіри кролика. Гріти при 100 o C 20-годинна культура не викликає накопичення рідини в ізольованій петлі тонкого кишечника кролика (V / L = 0,3).

Умови зберігання культури після леофільной сушки при вирощеної в 0,3% -ному МПА (рН 7,2), залитим стерильним вазеліновим маслом, при температурі 4 o C.

Середовища для розмноження - бульйон Хоттингера (рН 7,2), що містить 5% еритроцитів кролика при 37 o C протягом 24 год.

Генетичні особливості: Hly +, Ent +, MS +, MR +.

Стійкий до пеніциліну, тетрацикліну, еритроміцину, левоміцетину, карбеніцилін, рифампіцину, олеандоміцин.

Приклад 1. 0,1 мл 1 млрд. Суспензії добової агарового культури в фізіологічному розчині сіють в стерильний бульйон Хоттингера (5 мл рН 7,2) інкубують в термостаті при 30 o C протягом 20 годин, центрифугують при 6000 об / хв протягом 7 хв. Отриману надосадову рідину (центрифугат) в обсязі 0,05 мл вводять субплантарно в задню ліву лапку мишей-самців вагою 15-16 г. Через 24 год тварин умертвляють ефіром і ампутовані по гомілковостопного суглоба лапки зважують на торсійних вагах, при цьому центрифугат штаму Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 давав різницю між лівою і правою лапками більше 95 мг, інші 20 штамів, здатні продукувати ЛТ-ентеротоксин, від 65 до 79 мг. Контролі - нативний стерильний бульйон Хоттингера (рН 7,2) і гріти при 56 o C центрифугат 20-годинний бульонной культури 30-35 мг, відповідно.

Результати наведені в таблиці.

0,1 мг 1 млрд. Суспензії добової агарового культури сіють в бульйон Хоттингера (рН 7,2), інкубують в термостаті при 30 o C протягом 20 год і 500 млн. М. Т. Суспензію в обсязі 1 мл вводять в сегмент ізольованою петлі тонкого кишечника кролика. Через 16 год тварин умертвляють повітряної емболією і розраховують співвідношення обсягу ексудату до довжини сегмента (V / L). При цьому 20-годинна бульйонна культура штаму Enterobacter agglomerans ГИСК N 257 виявилася здатною давати накопичення рідини у великій кількості і показник V / L склав 1,2. У решти 20 штамів, здатний продукувати ЛТ-ентеротоксин, показник V / L коливався в межах 0,9-1,0. При введенні стерильного бульйону Хоттингера і грітися при 100 o C 20-годинний бульонной культури відношення обсягу накопиченої рідини до довжини сегмента склало 0,25 і 0,3, відповідно.

Штам бактерій Enterobacter agglomerates ГИСК N257, що володіє комплексом факторів патогенності.