Біопсія при раку шкіри
Біопсія при раку шкіри. Гістологічне дослідження пухлини шкіри.
З метою виключення злоякісної пухлини шкіри воно повинно проводитися при всіх шкірних вузлах, а також доцільно при пухлинах, які планується піддавати променевої терапії, після якої тканину пухлини стає непридатною для гістологічного дослідження. Гістологічне дослідження дає можливість оцінити, видалена пухлина в межах здорової шкіри. У деяких випадках необхідне проведення мікроскопічно контрольованої операції по серійним гістологічним зрізах. Гістологічне дослідження необхідно для визначення тактики лікування хворого і прогнозу захворювання. Повторні біопсії з інтервалом в декілька тижнів або місяців можуть бути використані для моніторингу прогресування-вання лімфоми шкіри або ефективності її лікування. Гістологічні препарати можуть довго зберігатися, переглядатися в будь-який час, а також використовуватися як документ.
Біопсія - метод отримання тканини живого організму для морфологічного дослідження з діагностичною метою. Вона повинна виконуватися в умовах операційної або перев'язочній з дотриманням всіх правил асептики і антисептики. При цьому для встановлення кордону новоутворення і мабуть інтактною тканини необхідно хороше освітлення операційного поля. Біопсія виконується гострим інструментом, розтинає, а не розминаючим шкіру.
У дерматоонкології використовуються Ексцизійна біопсія. при якій січуть вся пухлина, і інцизійна біопсія, при якій січуть тільки частина новоутворення (в центрі, а не з периферії пухлини та з захопленням інтактною тканини). Матеріал для гістологічного дослідження також може бути отриманий шляхом кюретажа з використанням кюретки в формі кільця або хірургічної ложки. Пункційна біопсія проводиться спеціальним трубчастим ножем діаметром від 2 до 8 мм (найчастіше діаметром 4 мм). Він являє собою порожнистий циліндр з ріжучим краєм, який просувають в товщу шкіри, врашая великим і вказівним пальцями. При цьому отримують стовпчик тканини, що складається з епідермісу, дерми і підшкірної жирової клітковини; підставу стовпчика видаляють ножем. Шкірний дефект закривається швом або проводиться гемостаз за допомогою пов'язки, що давить або гемостатичну губки. Біопсію шляхом зрізання бритвою, скальпелем або ножицями застосовують при вузловий базаліома і керато-мантоме. Розріз слід робити паралельно лініям шкірного натягу.
Різноманітність методів дослідження матеріалу (світлова, електронна мікроскопія, иммунофлюоресцентное фарбування) робить біопсію шкіри одним з найпростіших і інформативних методів діагностики пухлин шкіри.
Для звичайного гістологічного дослідження зразок поміщається в 10% розчин формаліну. Стандартно фіксовані препарати не придатні для гістохімічних, цитохімічних, імуногістохімічних і електронномікроскопічних досліджень.
Для електронної мікроскопії використовується буфер - глутаральдегід, а перед проведенням иммунофлюоресцентного дослідження зразок пухлини повинен бути негайно заморожений або поміщений в спеціальний транспортний буферний розчин.
Широке поширення отримують методи иммуноморфологических аналізу матеріалу біопсії. За допомогою антитіл до різних компонентів зовнішньої мембрани або цитоплазми клітин уточнюються гістогенез пухлини, ступінь її диференціювання, початкові етапи інвазії. Використовуваними з цією метою маркерами можуть бути як речовини антигенної природи (білки, поліпептиди, полісахариди), так і відносно прості з'єднання або навіть хімічні угруповання, що не володіють антигенними властивостями.
Для виявлення клітин плоского епітелію проток еккрінних. апокрінних і сальних залоз, а також гістогенетіческі пов'язаних з ними пухлин шкіри, використовують антитіла до антигенів епітеліальної мембрани (ЕМА), що складається з глікопротеїнів з високою молекулярною масою.
Цитокератини. що представляють собою групу проміжних волокон різного молекулярного ваги, виявляються в зроговілому і незроговілий епітелію. Для ідентифікації, наприклад, кератинів високого молекулярного ваги, експрессіруемих багатошаровим плоским епітелієм, використовуються панцітокератіни САМ 5.2 і АР34. Ряд антитіл до кератину розпізнають унікальні епі-топи придаткових структур шкіри. З їх допомогою також можна визначати гістогенез або напрямок диференціювання багатьох пухлин пілосебоцейного комплексу і потових залоз.
Для ідентифікації м'якотканинних пухлин. поряд з антитілами до цитокератин також використовують антитіла до інших основних типів білків проміжних волокон - віментин, десмін і білку нейрофиламентов. Віментин присутня в багатьох клітинах шкіри (фібробластах, макрофагах, хондроцитах. Ендотеліальних і лімфоїдних клітинах), тому застосування його маркерів вельми обмежена. Навпаки, десмин (поліпептид з молекулярною масою 53 000) характерний для більшості міоцитів і тому не виявляється в саркомах, що виникли без участі м'язової тканини. Нейрофіламенти, які варіюють за молекулярною масою від 68 000 до 200 000, ідентифікуються в шкірних пухлинах з клітин Меркеля і карциному-ідних пухлинах. Менш доцільно їх використання при фіброгістіоцітарних пухлинах. Хоча в деяких справжніх гістіоці-тарних пухлинах можуть ідентифікуватися антитіла до про-антитрипсину, антіхімотріп-сину і лізосомам. Порівняно недавно відкрито поліклональних антитіл проти фактора ХШа. Передбачається, що це клітинний маркер особливої субпопуляції дермальних фіброгістіоцітарних клітин, які називаються дермальними дендроцітамі. Незважаючи на те що фактор ХШа виявляється в багатьох клітинах при різних типах м'якотканинних пухлин, специфічним він є лише для певних пухлин, наприклад для гістіоцитоми, багатої, на відміну від вибухаючої дерматофібросаркоми, фактор ХIIIа-позитивними клітинами.
Пухлини кровоносних і лімфатичних судин можуть бути ідентифіковані різними ендотеліальними маркерами. Антитіла до антигену, пов'язаному з фактором VIII використовуються для ідентифікації нормального і неопластического ендотелію, тому що вони не реагують з тканиною лімфатичних капілярів, Для ідентифікації судинного ендотелію також використовується Ulex Europaeus агглютинин 1. В нефіксованих заморожених зрізах для відмінності між пухлинами лімфатичних і кровоносних судин використовують EN4 і PAL-E. Лімфатичні і дрібні кровоносні судини позитивно фарбуються на EN4. Навпаки, на PAL-E можуть позитивно фарбуватися венули, вени, капіляри, артеріоли і артерії, а лімфатичні судини - негативно,
З метою ідентифікації лімфом шкіри і відмінності їх від шкірних захворюванні (укусів комах, лімфоцітоми і т.д.) використовують панель лейкоцитарних маркерів; для имму-ногістохіміческого виявлення дифференцировочного антигенів мембран пухлинних клітин використовуються маркери цитокінових рецепторів.