Реакція аглютинації, її різновиди, способи постановки, застосування

Реакція аглютинації (РА) - це склеювання і випадання в осад мікробів або інших клітин під дією антитіл в присутності електроліту. Осад називають агглютінати.

1. Для виявлення антитіл в сироватці крові хворого (серодиагностика).

2. Для визначення виду і серовар виділеної від хворого чистої культури патогенних мікроорганізмів (серотіпірованіе).

Реакцію аглютинації використовують для визначення антитіл в сироватці крові хворих, наприклад, при черевному тифі і паратифах (реакція Відаля), бруцельозі (реакції Райта, Хеддлсона), туляремії, лептоспирозах та інших інфекційних хворобах, а також для визначення виділяється від хворого збудника (кишкові інфекції , коклюш та ін.). РА застосовується для визначення груп крові, резус - фактора і ін.

Для реакції необхідні наступні компоненти:

1. Антиген (агглютиноген) повинен бути корпускулярним, тобто це суспензія живих або убитих мікроорганізмів (діагностику м), еритроцитів або інших клітин. Зазвичай використовують добову культуру мікроорганізмів, вирощену на скошеному агарі. Культуру змивають 3 - 4 мл ізотонічного розчину, переносять в стерильну пробірку, визначають густоту. Суспензія повинна бути однорідною і містити до 3 млрд. Мікробних клітин в 1 мл. Застосування суспензії убитих мікробів - діагностикумів - полегшує роботу (готуються на виробництві).

2. Антитіла (аглютиніни) знаходяться в сироватці хворого (при серодіагностики) або в агглютинируют сироватці (при серотипування). Агглютинирующие сироватки отримують шляхом імунізації кроликів убитими бактеріями.

Титром агглютинируют сироватки називається найбільше її розведення, в якому на реагує з відповідним антигеном в певних умовах досвіду.

Агглютинирующие сироватки можуть бути нативними (неадсорбованими) і адсорбованими. Нативні сироватки в невеликих розведеннях взаємодіють не тільки з тим видом мікроорганізмів, яким імунізували тварина для отримання сироватки, а й з родинними видами мікроорганізмів, т. К. В них присутні групові антитіла (антитіла до мікроорганізмів, що має спільні антигени). Нативні сироватки використовуються для розгорнутої реакції аглютинації (при серодіагностики), де враховується не тільки наявність реакції, але і динаміка наростання титру антитіл.

Якщо з нативної сироватки витягти (адсорбувати) групові антитіла шляхом взаємодії зі спорідненими бактеріями, мають групові антигени, виходять адсорбовані сироватки. Адсорбовані сироватки можуть бути монорецепторними (або типоспецифічними), що містять антитіла тільки до одного антигенною рецептору, Полівалентні сироватки складаються з суміші декількох адсорбованих або неадсорбованими сироваток. Адсорбовані сироватки використовують для реакції аглютинації на склі.

При імунізації тварин рухливими бактеріями з Н-антигеном отримують Н-агглютинирующие сироватки, що містять Н-антитіла (наприклад, сальмонельозної монорецепторная Н-агглютинируют сироватка). Імунізацією О-антигеном отримують О-агглютинирующие сироватки, що містять О-антитіла, (наприклад, сальмонельозної групова адсорбована О-агглютинируют сироватка, протихолерні О-агглютинируют сироватка). Імунізацією Н і О-антигенами отримують сироватки з Н і О-антитіла.

Причому О-агтлютініни дають дрібнозернистий агглютінати, а Н-аглютиніни - крупнохлопчатий осад.

3. Електроліт - ізотонічний розчин NaCl (0,9% розчин хлориду натрію, приготований на дистильованої воді).

Існує два основні методи постановки реакції аглютинації: реакція на склі (іноді її називають орієнтовною або пластинчастої) і розгорнута реакція (в пробірках)

Постановка реакції аглютинації на склі. На знежирене предметне скло наносять дві капели сироватки і краплю ізотонічного розчину хлориду натрію. Діагностична агглютинируют сироватка береться в одному розведенні, яке в залежності від її титру становить 1:10, 1:25, 1:50 або 1: 100. В одну з крапель сироватки і краплю ізотонічного розчину петлею вносять культуру досліджуваного мікроорганізму і ретельно перемішують. Крапля хлориду натрію з мікроорганізмами - контроль антигену, крапля сироватки без мікроорганізмів - контроль сироватки. Не можна переносити культуру з краплі з сироваткою в краплю з NaCl. Реакція протікає при кімнатній температурі протягом 1-3 хв. Якщо контроль сироватки залишається прозорим, у контролі антигену спостерігається рівномірне помутніння, а в краплі, де культура змішана з сироваткою, з'являються пластівці агглютіната, то результат вважають позитивним. Якщо в краплі з сироваткою і антигеном рівномірне помутніння, то це негативний результат. Реакція виразніше видно на темному тлі.

1. контроль антигену

2. контроль сироватки