Типи культивованих клітин

Типи культивованих клітин. Перещеплюваних клітинні лінії

Деякі види клітин діляться in vitro лише кілька разів, інші можуть пережити до ста клітинних поколінь; є клітини, які можуть розмножуватися невизначено довго. Ці відмінності, природа яких повністю не ясна, дозволяють поділити культивовані клітини на три основні типи.

Первинні культури клітин. Клітини, тільки що взяті від тварини і перекладені в культуру, представлені різними типами; велика частина цих клітин здатна до досить обмеженої росту in vitro - мабуть, не більше ніж до 5-10 контрольними позначками. Однак в цих клітинах можуть розмножуватися багато вірусів, тому первинні культури, отримані з нирок мавпи, нирок ембріона людини, амніону людини, курячих ембріонів і ембріонів мишей, широко використовують як в лабораторних дослідженнях, так і для виробництва вакцин.

Диплоїдні клітинні штами. Це клітини одного типу, які здатні зазнавати in vitro до 100 поділок, зберігаючи при цьому збій вихідний диплоїдний набір хромосом (Хейфлик, 1965). Диплоїдні штами фібробластів, отримані з ембріонів людини, широко використовуються в діагностичної вірусології та при виробництві вакцин, а також застосовуються в експериментальних дослідженнях. Слід мати на увазі, що деякі можливості вірусного генома реалізуються лише в клітинах, що зберігають нормальний рівень диференціювання.

Перещеплюваних клітинні лінії. Це клітини одного типу; які здатні невизначено довго розмножуватися in vitro. Такі «безсмертні» лінії зазвичай ведуть своє походження від пухлин або трансформованих диплоїдних клітинних штамів. Часто вони втрачають схожість з тими клітинами, від яких відбулися, так як протягом тривалого культивування зазнають численні послідовні мутації. Найбільш поширеним показником цих змін є дедифференцировка, т. Е. Зникнення тих морфологічних і біохімічних особливостей, якими клітини мали in vivo. Так, наприклад, під мікроскопом неможливо розрізнити лінії епітеліальних клітин ектодермального і ептодермального походження, а також лінії фібробластів мезодермального походження. Клітини перевіваемих ліній часто анеуплоїдних і можуть давати пухлини при трансплантації тваринам.

Перещеплюваних клітинні лінії нер-2. HeLa і KB, провідні початок від карцином людини, підтримують розмноження багатьох вірусів. Ці лінії, а також лінії, що походять від клітин тканин мишей (L929, ЗТЗ) і хом'ячків (ВНК-21), широко використовуються в експериментальній вірусології; в даний час відомий ряд перевіваемих клітинних ліній, отриманих з клітин різних тварин. В американській колекції клітинних культур зберігаються в замороженому стані багато клітинні лінії, перевірені на відсутність екзогенних вірусів і мікоплазм.

Велика перевага перещеплюваних клітинних ліній в порівнянні з перрічнимі культурами клітин полягає в тому, що їх можна розмножувати як завгодно довго, пересаджуючи клітини через певні проміжки часу. Більш того, клітини зберігають життєздатність протягом багатьох років, якщо їх зберігати при низькій температурі (від -70 до - 196 ° С) у вигляді суспензії в гліцерині або диметилсульфоксиде. Так як клітини при серійному пасирування неминуче змінюються, в лабораторії зазвичай зберігають при низькій температурі велике число ампул з клітинами і використовують їх як посівний матеріал для отримання партій, які відповідають вимогам експерименту.

Деякі перещеплюваних клітинні лінії були адаптовані до зростання в так званій суспензійний культури, т. Е. В суспензії окремих клітин, яка постійно перемішується обертовим магнітом. Такі культури особливо зручні при біохімічному вивченні розмноження вірусів і при промисловому виробництві вакцин.

У молекулярній біології перещеплюваних культури клітин з великим успіхом використовують при дослідженні макромолекулярних процесів. Часто застосовують суспензійні культури, що дають велику і однорідну популяцію клітин, яку можна синхронно заразити вірусом, а потім швидко приготувати необхідні проби. Для вирощування великої кількості клітин, здатних рости тільки в монослое, або вірусів, що вважають за краще розмножуватися в моношарових культурах, застосовують великомасштабні «роллерниє» культури, в яких клітини у вигляді моношару прикріплені до внутрішньої поверхні циліндричних судин, повільно обертаються в горизонтальному положенні.