Рекомбінантна ДНК плазміда - це, що таке, визначення, значення, доповідь, реферат, конспект,
Історія отримання
Отримання рекомбінантних ДНК в штучних умовах і клонування генів вперше було здійснено в 1972 р американськими вченими Бойером і Коеном.
Хромосомну ДНК бактерії E. coli і її плазміди вони піддавали обробці в спеціальних пробірках ферментом рестриктазой Eco RI (Еко-ер-один), що утворює «липкі» кінці. У зв'язку з тим, що в складі кільцевої плазміди міститься тільки одна специфічна нуклеотидних послідовність, яку розпізнає і розрізає фермент рестриктаза Eco RI, цей фермент розрізає подвійний ланцюг ДНК плазміди тільки в одному місці і переводить кільцеву плазмиду у відкритий стан з «липкими» кінцями. Молекула ДНК хромосоми розділяється на стільки відрізків, скільки вона містить специфічних нуклеотидних послідовностей, які можуть бути розпізнані ферментом рестриктазой Eco RI. Відрізки ДНК в сильному електричному полі електрофоретичної установки поділяються за величиною, і виділені відрізки фарбуються спеціальною фарбою. В результаті утворюються видимі неозброєним оком набори відрізків ДНК однієї величини. З електрофоретичного гелю можна виділити відрізок ДНК будь-якої величини шляхом його розчинення у воді. Таким способом Бойєр і Коен змішали в пробірці виділений відрізок ДНК хромосоми з «липкими» кінцями і ДНК плазміди, що знаходиться у відкритому стані, і зшили ці різні відрізки ДНК за допомогою ферменту лігази з утворенням ковалентного зв'язку. В результаті до складу плазміди був введений відрізок ДНК хромосоми. Таким чином, була вперше створена рекомбінантна плазміда (рис. 10).
клонування генів
У цій молекулярної конструкції ДНК плазміди виконує векторну (направляючу) функцію, оскільки плазміди можуть рекомбінуватися в хромосомної ДНК. Ця векторна конструкція в силу наявності в ній гена стійкості до антибіотиків була введена в безплазмідних, т. Е. Нестійку до антибіотиків бактеріальну клітину. Бактерії з рекомбінантними плазмідами в силу того, що вони мають ген стійкості до антибіотиків, на відміну від безплазмідних бактерій, не гинуть в живильному середовищі. містить антибіотик. Тому в дослідну пробірку вводиться антибіотик і виділяється клон рекомбінантної бактерії, який потім вирощується. У кожній бактерії, що становить даний клон, міститиметься відрізок чужої (гетерологичной) ДНК, і цей відрізок може розмножуватися в міру розмноження бактеріальної біомаси. Крім того, якщо рекомбінантний плазміда має здатність до автономної реплікації, то відрізок чужої ДНК може розмножуватися ще десятки разів. Розмноження чужий ДНК за допомогою векторної конструкції називається клонуванням генів. Як вектора при клонуванні відрізків ДНК можуть бути використані вірусні і фагів молекули ДНК або блукаючі гени.