Приготування постійних препаратів фітопатогенних грибів

Препарати фітопатогенних грибів, що зберігаються протягом тривалого часу, служать в першу чергу в якості контрольного матеріалу при ідентифікації.

Можливості використання збудників хвороб, роками культивованих in vitro, для штучних заражень дуже обмежені, так як агресивність багатьох збудників слабшає, а це може привести і до втрати патогенності. Явища дегенерації можна уповільнити шляхом регулярних пересівань (при чергуванні певних поживних середовищ), культури на природних субстратах або під шаром парафіну та масла і зберігання при 10-15 ° С в пилонепроникних шафах. У більшості випадків при проведенні масових дослідів доцільно вдаватися до свежеізолірованним збудників. І все ж в практиці захисту рослин для полегшення діагностики зручніше мати точно визначений контрольний матеріал. Нижче описані деякі прості способи приготування постійних препаратів.

Сухі препарати уражених частин рослин. Якщо уражений рослинний матеріал з плодовими тілами або спорокучкамі патогенів потрібно зберегти на тривалий час, то для іржавинних і сажкових грибів, збудників справжніх борошнистих рос з клейстотециями і деяких хвороб кори дерев (види Valsa) рекомендується висушування. Вражений матеріал добре висушують на повітрі і потім зберігають у етикетувати закритих судинах, наприклад скляних банках з кришками.

В якості контрольного матеріалу може також служити гербарій з рослин з типовими симптомами поразок. Частини рослин по можливості відразу після збору прокладають листами фільтрувального паперу, а потім за допомогою вузьких смужок клейкої стрічки наклеюють на картон. При цьому слід закріплювати всі наявні органи гриба. Напис має включати назву рослини-господаря і збудника хвороби, місце і рік збору. З такого гербарію деякі гриби можна ізолювати або визначати протягом ряду років.

Препарати уражених частин рослин, фіксовані в рідини. Чи не містять хлорофілу частини рослин, наприклад коріння, бульби картоплі, коренеплоди буряка, плоди та ін. Після очищення поміщають в 2-5% -ний розчин формаліну (20-50 мл торгового препарату на 100 мл дистильованої води). При помутнінні розчин через кілька днів можна змінити. Щоб зберегти тонкостінні органи грибів, наприклад конідієносци збудників неправдивих борошнистих рос, частини рослин поміщають в 40% -ний спирт, який також можна через кілька днів змінити. При більш високій концентрації спирту органи грибів обезвоживаются і деформуються.

Щоб досить чітко зберегти симптоми ураження на хлорофиллсодержащих частинах рослин, використовують обробку сірчанокислої міддю. Як приклад можна привести три рецепта.

1. Частини рослин на 24 год поміщають в 0,5% -ний розчин CuSO4 і потім переносять в суміш з 800 мл дистильованої води, 100 мл 1% -ної CuSO4 і 100 мл технічно насиченою H2 SO4.

2. Частини рослин поміщають на 24 ч в 5% -ний розчин CuSO4. потім промивають у проточній воді або при багаторазовій зміні води до тих пір, поки вона не стане чистою, і переносять в 5% -ний розчин формаліну.

3. Частини рослин поміщають в киплячий розчин з однієї частини крижаної оцтової кислоти (насиченого кристалами ацетату міді) і чотирьох частин води і кип'ятять, поки ацетат міді витіснить хлорофіл в клітинах. Після цього матеріал можна зберігати в 5% -ному формаліні або 70% -ному спирті.

Зберігання суперечка іржавинних і сажкових грибів. Уредо-, телейто - і ецідіоспори іржавинних грибів, а також сажкові спори можна без особливих труднощів тривалий час зберігати на сухому матеріалі, хоча при цьому вони втрачають життєздатність. Однак при багаторічному утриманні в вакуумі здатність до проростання і зараження не слабшає, тому вакуум дуже широко практикується для зберігання Уредоспори іржавинних грибів зернових культур. Спори струшують з уражених рослин на пергаментний папір, тонкої акварельного пензликом очищають від домішок і висушують 1-2 дня над парами 35% -ної сірчаної кислоти. Потім ними заповнюють пробірку-ампулу поперечним діаметром близько 8 мм, за допомогою вакуум-насоса видаляють повітря і запаюють. При зберіганні пробірок в холодильнику при 3-5 ° С здатність суперечка до проростання і зараження не губиться понад 10 років.

Прості постійні препарати. Щоб зберегти на тривалий час в якості наочного посібника окремі органи гриба (спори, плодові тіла, особливі освіти міцелію) або зрізи тканин, можна приготувати постійні мікроскопічні препарати. У найпростішому випадку для цього отримують звичайний препарат, але не в воді, а в розчині Аман (20 г молочної кислоти, 40 г гліцерину, 20 г фенолу і 20 мл дистильованої води) і по краях покривають його безбарвним лаком для нігтів.

Хорошим фіксуючим матеріалом служить також лактофенол. Препарат поміщають в 10% -ний розчин КОН на предметному склі і освітлюють при обережному нагріванні, потім ретельно промивають водою і забарвлюють лактофенол-бавовняної синню. Через 5-10 хв фарбу видаляють чистим лактофенолом і препарат запаюють безбарвним лаком по краях покривного скла.

Прості постійні препарати отримують і з використанням гліцерин-желатину. Шматочок студенистого гліцерин-желатину поміщають на предметне скло і проносять над слабким полум'ям пальника, потім поміщають об'єкт і обережно накривають зігрітим покривним склом. Цей процес вимагає навику, так як в препараті легко утворюються бульбашки повітря, які перед нанесенням лаку необхідно видалити слабким нагріванням і переміщенням покривного скла.

Примітка. При використанні постійних мікроскопічних препаратів для порівнянь слід враховувати, що внаслідок втрати води тонкостінні об'єкти з часом можуть більш-менш сильно деформуватися.

Поділіться посиланням з друзями