Методи мікробіологічної діагностики інфекційних захворювань

Мікроскопічний. За допомогою мікроскопії нативного патологічного матеріалу визначають вид збудника захворювання за формою, взаиморасположению і здатності забарвлюватися певними кра-носія.

Бактеріологічний. Цей метод заснований на виділенні чистої культури збудника захворювання і його ідентифікації (визначення виду мікроба).

Серологічний. Метод заснований на визначенні специфічних антитіл в крові хворих або перехворілих інфекційними заболева-нями до відповідних збудників за допомогою різних реакцій (аглютинації, пасивної гемаглютинації, зв'язування комплементу, преципітації та інших).

Біологічний. В основі цього методу лежить зараження лабораторних тварин досліджуваним матеріалом від хворого з метою відтворення у них інфекційного захворювання або подальшого виділення збудника.

Алергічний. За допомогою цього методу виявляють підвищений-ву чутливість макроорганізму до певних збудників інфекційних захворювань або продуктів їх життєдіяльності. Для алергічних проб використовують препарати, які називаються алергенами.

Молекулярно-генетичний. За допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) визначають в досліджуваному матеріалі наявність збудника інфекційного захворювання за специфічним для нього послідовностям нуклеотидів.

ОЗНАКИ, ЩО ВИКОРИСТОВУЮТЬСЯ ДЛЯ ІДЕНТИФІКАЦІЇ МИКРООРГАНИЗМОВ (для визначення виду мікроба)

Морфологічні - форма, величина і характер розташування мікробів один до одного.

Тінкторіалние - здатність мікробів фарбуватися различ-ними барвниками.

Культуральні - особливості росту мікробів на рідких і щільних поживних середовищах.

Біохімічні - здатність мікроорганізмів споживати різні речовини (вуглеводи, білки та інші) з утворенням характерних кінцевих продуктів, або наявність у мікроорганізмів різних ферментів (уреаза, цистиназу і інші).

Антигенні - особливості хімічного складу мікробних клітин (антигенної структури), які виявляються за допомогою специфічних діагностичних імунних сироваток,

Чутливість до специфічних фагів - здатність бактерій лізуватись еталонними специфічними фагами.

Біологічні властивості. Токсигенність - здатність Продуція-ровать екзотоксин. Чутливість до певних коліціни або тип синтезованих коліцінов.

Визначення понять "мікроорганізми" та "вид"

Мікроорганізми - це невидимі неозброєним оком живі істоти, що включають в себе представників всіх царств життя - плазміди, віруси, прокаріоти (еубактеріі і архебактерии) і еукаріоти. Вони стоять на нижчих щаблях еволюції і грають важливу роль як у загальній економіці природи, так і в патології людини, тварин і рослин.

Вид - сукупність мікроорганізмів, що мали спільний корінь походження, подібний генотип (більше 80% гомології ДНК) і максі-мально близькі фенотипічні ознаки і властивості.

Метод люмінесцентної мікроскопії.

Люмінесцентна мікроскопія заснована на здатності деяких речовин світитися під дією короткохвильових променів світла. При цьому довжина хвилі випромінюваного при люмінесценції світла завжди буде більше, ніж довжина хвилі світла, що порушує люмінесценцію. Так, якщо висвітлювати об'єкт синім світлом, то він буде випускати промені червоного, оранжевого, жовтого або зеленого кольорів.

Препарати для люмінесцентної мікроскопії забарвлюють спеці-ними (світяться) люмінесцентними барвниками - флуорохромами (наприклад, розчин акридинового оранжевого 1: 5000 - 1: 10000). Промені світла від сильного джерела (зазвичай ртутної лампи надвисокого тиску) пропускаються через синьо-фіолетовий фільтр. Під дією цього короткохвильового випромінювання пофарбовані акридиновим помаранчевим бактерії починають світитися червоним або зеленим світлом. Для того, щоб синє світло, що викликає люмінесценцію, не заважав спостереженню, над окуляром мікроскопа ставлять "замикає" жовтий світлофільтр, що затримує сині, але пропускають жовті, зелені та червоні промені.

В результаті при спостереженні в мікроскопі на темному тлі буде видно мікробні клітини, що світяться жовтим, зеленим або червоним кольором. При фарбуванні акридиновим помаранчевим дезоксирибонуклеїнової кислоти (ядерне речовина) буде світитися яскраво-зеленим кольором, а знаходиться в цитоплазмі рибонуклеїнова кислота - червоним кольором.

Метод люмінесцентної мікроскопії дозволяє вивчати живі нефіксовані бактерії, пофарбовані сильно розведеними розчинами барвників, які не завдають шкоди мікробним клітинам. За характером світіння можуть бути диференційовані окремі хімічні речовини, що входять до складу мікробної клітини. Метод з великим ефектом може -бути використаний для прискорення діагностики ряду захворювань.

Флуоресціюючими барвниками можна обробляти діагностичні сироватки, що містять антитіла до певних бактерій. Барвник, наприклад, изотиоцианат флуоресцеїну, хімічно з'єднується з глобулінами імунної сироватки і таким чином як би виборець-но мітить антитіла.

Люмінесцирующие сироватки можуть бути використані для ідентифікації виділених культур бактерії і для прискореної індикації патогенних мікробів у зовнішньому середовищі і в виділеннях хворих.

Сутність імунофлуоресцентного методу дослідження полягає в тому, що з досліджуваного матеріалу готують мазок і після висушування і фіксації обробляють його люминесцирующей сироваткою. При наявності в досліджуваному мазку гомологічних бактерій, внаслідок адсорбції на них мічених флуоресцирующим краси-телем антитіл, в люмінесцентному мікроскопі на темному тлі препарату виявляється специфічне яскраве жовто-зелене свічення по периферії бактеріальних клітин. Центральна частина клітин не світиться. Присутні в препараті сторонні мікробні клітини не світяться.