Лабораторна діагностика бруцельозу - студопедія

Збудники бруцельозу (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis і Brucella canis) високо контагіозний і робота з ними проводиться в спеціалізованих лабораторіях особливо небезпечних інфекцій. Постановку серологічних реакцій і аллерги-чеських проб для діагностики бруцельозу проводять відповідно до звичайних мікробіологічних лабораторіях і лікарняних умовах.

Головним резервуаром бруцел є домашні сільськогосподарські тварини, а також інші види тварин, від яких людина заражається переважно контактним або контактно-побутовим, рідше аліментарним шляхом. Клінічні прояви бруцельозу різноманітні, уражаються лімфатична, судинна, гепато-ліенальний системи і особливо опорно-руховий апарат Методи мікробіологічної діагностики бруцельозу представлені в схемі 7.

Схема 7. Лабораторна діагностика бруцельозу

Серологічний метод - постановка РА з сироваткою крові хворого (реакція Райта, ставлять на початку 2-го тижня хвороби, діагностичний титр 1: 200 і вище), прискореної РА на склі (реакція Хеддльсона), РСК і ІФА.

Діагностикумів в реакції Райта і Хеддльсона є суспензія вбитих бруцел з барвником генціановий фіолетовим або метиловим фіолетовим.

Реакцію аглютинації Хеддльсона ставлять на скляній пластинці, на яку наносять мікропіпеткою нерозведену досліджувану сироватку в кількостях 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 і 0,02 мл, додають по 0,03 мл бруцельозного диагностикума, крім по-останньої дози, в яку вносять 0,03 мл ФР (контроль сироватки). Контролем диагностикума є суміш з 0,03 мл антигену і 0,03 мл ФР. Всі краплі перемішують скляною паличкою або бактеріологічною петлею і після легкого похитування скла спостерігають за появою дрібнозернистого пофарбованого агглютіната. Відсутність аглютинації у всіх пробах сироватки оцінюється як негативна реакція, наявність аглютинації в 1-й пробі (0,08 мл сироватки) - сумнівна, у 2-й (0,04 мл) - слабоположітельная, в 3-й або 4 й пробах (0,02-0,01 мл) - позитивна, у всіх пробах - рез-ко позитивна реакція. Оскільки реакція аглютинації Хеддльсона іноді буває позитивною у здорових людей за рахунок нормальних антитіл, вона обов'язково підтверджується реакцією Райта.

РИФ, РНГА, РСК і особливо ІФА більш чутливі, ніж реакція аглютинації. Для ранньої діагностики бруцельозу особливу цінність має ІФА, що дозволяє виявити в сироватці хворих антібруцеллезние антитіла класу IgM, Котория відміну від IgG по-є в ранні терміни хвороби, бо свідчить про свіжому інфікуванні.

Алергічний метод - постановка внутрикожной алергічної проби Бюрне з 15-20 дня захворювання. Облік реакції проводиться через 24-48 годин, поклади-котельної вважається реакція в разі появи на місці введення алергену (бруцеліну) хворобливості, гіперемії та інфільтрації шкіри діаметром 3 см і більше. Позитивна алергічна ре-акція на бруцеллін зберігається протягом тривалого часу після перенесеної-сінного бруцельозу, а також після щеплення.

Бактеріологічний метод - посів крові для виділення гемокультури в 2 флакона з 50 мл печінкового або асцитичної бульйону (рН 7,1-7,2) або МПБ з додаванням 1% глюко-зи, 2% гліцерину і антіфаговой сироватки (для інактивації бруцельозного бактеріофага) в перші дні хвороби при наявності лихоманки. При негативних резуль-татах дослідження повторюють, тому що бактериемия наблю-дається протягом 1 року і більше.

Один флакон вирощують в звичайних аеробних умовах, інший - в герметично закритій посудині з 10% вуглекислого газу (або СО2 -інкубаторе) при температурі 37 0 С до 1 ме-сяца, роблячи пересівання на скошений пече-нічного агар або Еритреї-агар кожні 4 -5 днів. На рідких середовищах бруцели ростуть з утворенням легкого помутніння і невеликого слизового осаду, на щільних середовищах в вигляді округлих, діаметром до 5 мм, сірувато-білих, виблискуючи-чих, прозорих з бурштиновим відтінком в світлі колоній. Типові колонії пересівають на скошений агар і ідентифікують виділену культуру до рівня виду.

Виконуються також посіви ис-які належать їм матеріалу в жовток свіжого курячого яйця або в жовчі точний мішок курячого ембріона з подальшою їх инкубацией протягом 5 днів при 37 0 С і пересівом вмісту жовткового мішка на щільні і рідкі поживні середовища для виділення чистої культури бруцел.

Бруцели ідентифікують на підставі вивчення морфологічних (рис. 13 - грамнегативні коккобактерии), культуральних, біохімічних (вони не ферментують уг-

Мал. 13. Збудник бруцельозу (Brucella melitensis). Забарвлення по Граму. Дрібні грамнегативні коккобактерии.

леводи, що не згортають молоко і не розріджують желатину, виділяють сірководень), антигенних властивостей (постановка РА з моноспеці-фическими сироватками проти антігенові, М, R), чутливості до специфічного бактери-офагу і бактеріостатичного дії анілінових барвників (табл. 8).

Таблиця 8.Діфференціація основних видів бруцел