Бактеріологічна лабораторія, її завдання

ЗАНЯТТЯ 1. Бактеріологічна лабораторія. її завдання. Техніка безпеки в лабораторії. Пристрій мікроскопа. Особливості мікроскопії в мікробіологічній практиці (імерсійна система). Форми мікроорганізмів.

Мета заняття. Засвоїти правила роботи в бактеріологічній лабораторії. Ознайомитися з технікою безпеки і особистої профілактикою. Освоїти роботу з мікроскопом і особливості імерсійної системи. Вивчити форми бактерій.

Матеріали та обладнання. Мікроскопи, пофарбовані мікроскопічні препарати з різними формами мікроорганізмів, плакати.

Методичні вказівки. Після короткого пояснення викладача про порядок проведення роботи в лабораторії, необхідність дотримання техніки безпеки студенти знайомляться з пристроєм світлового мікроскопа, освоюють техніку мікроскопії готових препаратів, вивчають морфологію мікроорганізмів на препаратах і замальовують їх в зошиті.

Бактеріологічна лабораторія - це установа ветеринарної служби, діяльність якої спрямована на ліквідацію заразних хвороб тварин, а також охорону населення від хвороб спільних для тварин і людини. За масштабом роботи ветеринарні лабораторії бувають: районні, міжрайонні (зональні), обласні (крайові) і республіканські. Основне завдання бактеріологічних лабораторій - діагностика хвороб сільськогосподарських тварин (включаючи птахів), хутрових звірів, риб, бджіл, а також проведення експертизи харчових продуктів і кормів, санітарної оцінки води, повітря та ґрунту.

Лабораторію розміщують в окремій будівлі, далеко від проїжджих доріг. У ній передбачають приймальне відділення. бактеріологічний, вірусологічний, біохімічний, серологічний і патологоанатомічний відділи; виділяють спеціальні приміщення для стерилізації посуду і поживних середовищ, для миття посуду. Для виконання роботи в асептичних умовах обладнають спеціальні ізольовані приміщення - бокси. Лабораторних тварин розміщують в віварії. Крім того, є кімнати для фахівців, обслуговуючого персоналу, кабінет завідувача, приміщення для бібліотеки, складу, ваговій, роздягальні та ін.

Навчальна мікробіологічна лабораторія призначена для оволодіння студентами методами виділення та вивчення різних мікроорганізмів. У ній проводяться лабораторні заняття, передбачені програмою, а також науково-дослідна робота.

Якщо патологічний матеріал потрапив випадково на стіл, його негайно видаляють тампоном, змоченим дезінфікуючим розчином. При попаданні зараженого матеріалу на шкіру, кон'юнктиву, слизову ротової порожнини вживає екстрених заходів до знезараженню.

Після закінчення роботи використані культури мікроорганізмів, інструменти і поверхня стола знезаражують. В кінці заняття бактеріальні культури і інший матеріал студенти здають викладачеві, а робоче місце упорядковують. Перед відходом з лабораторії необхідно, вимити руки і обробити їх спиртом.

Прибирання лабораторного приміщення. Приміщення лабораторії щодня до роботи прибирають вологим способом. Пил з поверхонь протирають змоченою тканиною ганчіркою змоченою дезинфікуючим розчином. Після закінчення роботи стіни, вкриті метласькими плитками або пофарбовані масляною фарбою, миють гарячою водою з милом або пральним порошком. Підлоги миють 3-5% розчином дезінфектанту. Стелі, карнизи, верхня частина стін, пофарбовані клейовою фарбою, не рідше одного разу в тиждень очищають від пилу пилососом.

Підготовка боксу до роботи. Щодня перед початком роботи підлоги протирають дезинфікуючим розчином (2% - 5% розчином хлораміну); повітря знезаражують бактерицидними лампами. встановленими на висоті 2-2.5 м від поверхні підлоги, з розрахунку одна лампа БУВ-ЗО (1,5-2,5 Вт) на 1м 3 приміщення. При зазначених умовах бокс опромінюють 2год. Перед початком роботи лампи вимикають. Для того щоб запобігти зараженню боксу, зразки матеріалів, що підлягають дослідженню, вносять в бокс після попереднього ретельного протирання їх 3% розчином формаліну. Робота в боксі проводиться стерильних халатах, захисних масках і тапочках, спеціально призначених для боксу. Повітря в боксі слід регулярно, не менше 2 разів на тиждень, перевіряти на бактеріальну контамінацію. Чашки з мясопептонний агаром і середовищем Сабуро залишають відкритими на 15 хв. Посів на мясопептонном агарі витримують в термостаті 48 год при 37 ° С, чашки з середовищем Сабуро - 96 год при 22 ° С. Допустимим зростанням вважається 5 колоній на чашках. Кількість колоній більше 5 при 15-хвилинній експозиції є показником високої контамінації повітря боксу. У цих випадках по-ня боксу потребує додаткової, більш тщатель-ної обробці. Не менш ніж один раз на тиждень приміщення боксу миють гарячою водою з милом, дезінфекційними засобами і протирають насухо.

Прибирання робочого місця. Після закінчення роботи бе-рут пінцетом шматок вати, змочують його в 5% розчині хлор-аміну або формаліну і протирають ним поверхню столу на робочому місці.

Пристрій світлового мікроскопа і робота з ним.

Мікроскоп - складний оптичний прилад. використовуваний для вивчення морфології ітинкторіальних властивостей мікроорганізмів. Принципово всі мікроскопи влаштовані однаково і складаються з механічної частини і оптичної системи.

Механічну частину складають: підстава мікроскопа, тубусодержатель, тубус, система гвинтів для пересування, предметний столик і револьвер. Оптичну частину складають - окуляр, об'єктиви і освітлювальний апарат (рис. 1).

Робота з иммерсионной системою. Об'єктиви малого збільшення (3,5, 8, 9) застосовують головним чином для попереднього огляду препарату, об'єктиви середнього збільшення (20, 40) - для вивчення великих клітин мікроорганізмів (наприклад, грибів); ці об'єктиви називаються сухими, оскільки при мікроскопії між фронтальною лінзою і препаратом перебувати повітря. При цьому завдяки відмінності показників заломлення повітря (n = 1) і скла (n = 1,52) частина променів, які висвітлюють препарат, розсіюється і залишається поза увагою.

Ріс.1.Мікроскоп МБР-1. 1 підставу; 2 предметний столик; 3 гвинти для переміщення предметного столика; 4 клеми; 5 конденсор; 6 кронштейн конденсора; 7 гвинт, який зміцнює конденсор; 8 рукоятка переміщення конденсора; 9 рукоятка діафрагми конденсора; 10 дзеркало; 11 тубусодержатель; 12 рукоятка макрометріческого гвинта; 13 рукоятка мікрометричного гвинта; 14 револьвер; 15 об'єктив; 16 похилий тубус; 17 гвинт для кріплення тубуса; 18 окуляр.

Об'єктиви великих збільшень (85, 90) звуться іммерсійних. При роботі з ними необхідна максимальна освітленість препарату; усунення розсіювання, неминучого при роботі з сухими об'єктивами, в даному випадку досягається шляхом використання іммерсійних рідин, у яких показник заломлення близький до показника заломлення скла (рис.2).

Мал. 2. Схема променів в иммерсионной системі.
1 об'єктив мікроскопа; 2 предметне скло; 3 об'єкт дослідження; 4 іммерсійне масло; 5 промені світла; 6 фронтальна лінза об'єктива.

Спочатку під малим збільшенням мікроскопа наводять світло і визначають на препараті ділянку микроскопирования. Потім на вибране місце наносять краплю іммерсіі і обережно (під контролем очей з боку) занурюють в неї фронтальну лінзу иммерсионного об'єктива (90). Імерсіонні об'єктиви мають короткий фокусна відстань (до 2,3 мм) тому наводити на різкість слід шляхом піднімання об'єктива, а не опускання його, так як при невеликому робочому відстані можна розчавити препарат і пошкодити фронтальну лінзу. Після грубої наводки, яку проводять за допомогою макрометріческого гвинта, руки переводять на мікрометричний гвинт і здійснюють точне фокусування. Після закінчення роботи об'єктив піднімають, прибирають препарат, а з фронтальним лінзи шматочком фільтрувального паперу прибирають іммерсію.

Морфологія бактерій. За формою бактерій підрозділяють на три основні групи: кулясті (коки), циліндричні (палички) і покручені (рис. 3).

Для різних видів коків характерно своєрідне розташування клітин, обумовлене способом ділення.

Мікрококи - безладно розташовані коки, в діаметрі не перевищують 0,5 мкм.

Диплококи - коки, розташовані попарно, діляться в одній площині.

Стрептококи - розподіл їх відбувається в одній площині і утворюються клітини не роз'єднуються, розташовуючись ланцюжками. різної довжини.

Тетракоккі - поєднання кулястих бактерій по чотири, розподіл у яких відбувається в двох взаємно перпендикулярних площинах.

Стафілококи - діляться в різних площинах без особливої ​​закономірності, утворюючи безладне скупчення клітин, іноді нагадує грона винограду.

Сарціни за формою нагадують пакети або тюки. Утворюються в результаті поділу в трьох взаємно перпендикулярних площинах.

Паличкоподібні мікроорганізми поділяються на бактерії, бацили і клостридії.

Бактерії-циліндричні форми, не утворюють спор.

Бацили - спороутворюючі палички по типу дихання аероби, тобто для свого розвитку потребують вільному молекулярному кисні повітря.

Клостридії - спороутворюючі палички, за типом дихання анаероби (які не використовують кисень повітря), діаметр їх суперечки перевищує ширину мікробної клітини.

Покручені бактерії поділяються на вібріони, спірили і спірохети.

Мал. 3. Основні форми бактерій:
а - мікрококи; б, в - диплококки; г - стрептококи; д стафілококи; е - тетракоккі; ж - сарціни; з, і, до палички; л - вібріони; м - спірили

Вібріони мають форму коми, що летить чайки, поворот навколо осі не перевищує чверті обороту.

Спірілли - характеризуються невеликим числом великих завитків (не більше п'яти). Пересуваються за допомогою джгутиків.

Спірохети - мають штопорообразную форму з великою кількістю завитків. На кінці тіла пучком розташовані джгутики.