Зішкріб з епітеліальних клітин для виявлення ДНК збудників інфекцій, що передаються статевим шляхом

У чоловіків матеріалом для скринінгу на ІПСШ служать зіскрібки з уретри, опади клітин першої порції ранкової сечі, поміщені в 300 мкл транспортної середовища, секрети передміхурової залози. Досить інформативним є дослідження у чоловіків методом полімеразної ланцюгової реакції осаду першої порції ранкової сечі. У дітей матеріал беруть з зовнішнього отвору уретри, опади клітин першої порції ранкової сечі, мазки з кон'юнктиви.

Для скринінгу на ІПСШ у жінок досліджують зішкріб (мазок) з уретри, цервікального каналу, нижнього склепіння піхви, опади клітин першої порції ранкової сечі, які поміщаються в транспортну середу. При необхідності матеріал для дослідження береться з генітальних виразок (дослідження на герпетичну групу). У деяких випадках для діагностики можна використовувати зразки виділень з піхви, в тому числі взяті тампоном самостійно без відвідування кабінету забору клінічного матеріалу. Забір матеріалу у дівчаток проводиться зі слизової оболонки передодня піхви, з зовнішнього отвору уретри, опади клітин першої порції ранкової сечі, мазки з кон'юнктиви.

Фактори, що впливають на ефективність виявлення урогенітальних патогенних мікроорганізмів за допомогою нк

Причинами інгібування ПЛР-реакції можуть бути:

Наявність цервікальногослизу в клінічному матеріалі (частою причиною патологічних виділень можуть бути запалення, асоційовані з бактеріальним вагінозом і інфекційною патологією: кандидоз, трихомоноз, хламідійна або гонококковая інфекції).

Іони металів (Сa 2+. Fе 3+).

Білірубін і жовчні кислоти.

Продукти життєдіяльності мікроорганізмів.

Правила підготовки хворого для ПЛР-діагностики урогенітальних інфекцій

За 5-7 днів до прийому необхідно припинити прийом хіміопрепаратів і лікувальні процедури.

Рекомендується утримуватися від сечовипускання протягом 1,5-2 годин і більше перед взяттям матеріалу.

Досліджуваний матеріал повинен бути без домішок крові і слизу.

При уповільнених і хронічних інфекціях урогенітального тракту рекомендується застосовувати провокацію. Забір матеріалу роблять після провокації і через 24-48-72 години.

Взяття матеріалу повинен виробляти лікар акушер-гінеколог при підозрі на інфекційну природу патологічного процесу.

Контроль проведеної терапії слід проводити через 3-4 тижні після закінчення хіміотерапії. Повна елімінація ДНК відбувається в період від 2-х до 3-х тижнів.

Оптимальним для персистенції і розмноження збудників ІПСШ є певні ділянки циліндричного епітелію сечостатевих шляхів (передня уретра на глибині 2,5-4 см у чоловіків і слизова оболонка цервікального каналу матки 1,5 см у жінок).

При взятті зіскрібка з уретри у чоловіків необхідно обробити область зовнішнього отвору уретри тампоном, змоченим стерильним фізіологічним розчином, після чого зонд обережно вводять на глибину 1-4 см і роблять одне-два обертальні рухи, виробляючи зішкріб епітеліальних клітин, і переносять зонд в пробірку з транспортної середовищем.

Для отримання матеріалу з уретри у жінок - зонд обережно вводять на глибину 1 см і роблять одне-два обертальні рухи, після чого зонд витягують.

При взятті матеріалу з шийки матки ключовим моментом є видалення слизової пробки. Від ретельності проведення цієї підготовчої процедури багато в чому залежить можливість правильного зіскрібка з цервікального каналу. Слизову пробку видаляють стерильним ватним тампоном на стерильному пінцеті, обробляють шийку матки стерильним фізіологічним розчином і потім беруть матеріал цітощеточкой cervex brush або voba-brush. Її використання має ряд переваг, оскільки для отримання інформативного результату важлива присутність в соскобе клітин зі всієї поверхні шийки матки, цервікального каналу, зони трансформації і зовнішньої частини шийки матки. Щіточка вводиться в канал на глибину 0,5-1 см і обертається приблизно 15 секунд (одно-два обертальні рухи) після чого витягується.

У жінок для виявлення трихомонад, гонококів і гарднерелл, а також для інтегральної діагностики бактеріальних вагінозів також рекомендується брати матеріал з заднього склепіння піхви.

Матеріал рекомендується набирати в одноразову стерильну пробірку ( "Еппендорф" 1,5 мл) або в пробірку з 500 мкл транспортної середовища. Вона містить компоненти для розчинення слизу, пригнічення росту сторонніх мікроорганізмів, стабілізує ДНК / РНК збудників, а також контролює рН середовища (жіноча середа). Застосування транспортної середовища забезпечує якість на преаналітичному етапі, так як дозволяє зберігати клінічний матеріал при +25 о С протягом 28 діб.

За Європейським стандартам діагностики захворювань, що передаються статевим шляхом, для ПЛР-методів використовується матеріал, отриманий як інвазивних - з уретри, так і неінвазивним способом - перша порція сечі.

Об'єктом дослідження на наявність збудників ІПСШ можуть бути також змиви зі слизової оболонки очей, носоглотки, харкотиння, бронхоальвеолярний лаваж.