Приготування поживних середовищ

Ознайомлення з методикою приготування поживних середовищ для вирощування мікроорганізмів.

Для культивування мікроорганізмів використовують різні поживні середовища. Це необхідно для диференціації інфекційно-них хвороб, для приготування вакцин, антибіотиків та ін.

До живильних середовищ висувають такі вимоги: повинні містити всі необхідні речовини для харчування мікробів, мати певну реакцію середовища, бути стерильними і обов'язково вологими. Живильні середовища поділяють на Прості і складні.

До простих середах відносяться мясопептонний бульйон, мясопептонний агар, мясопептонний желатин (МТЖ). Всі прості живильник-ні середовища готують на м'ясній воді. Для її приготування м'ясо відділень-ляють від жиру і фасцій, подрібнюють, заливають водою в співвідношенні 1: 2 і кип'ятять протягом 30-60 хв. Потім фільтрують, доливають до першо-початкового обсягу і стерилізують при тиску 0,1 МПа протягом 30 хв.

Приготування МПБ полягає в наступному. До 1 л м'ясної води додають 1% пептони, 0,5% кухонної солі. Встановлюють реак-цію середовища (рН 7,2-7,4), кип'ятять, фільтрують, розливають по колбам і стерилізують при тиску 0,1 МПа 15-20 хв.

За консистенцією поживні середовища можуть бути Рідкими, напів-рідкими і щільними. Для приготування напіврідких і щільних середовищ до МПБ додають агар (відповідно 0,2-0,3 і 2-3%). Агар - це речовина, що отримується з морських водоростей. До його складу входять пектинові речовини. Агар плавиться при 90-100 ° С і застигає при температурі нижче 45 "С. Як поживна речовина агар мікроорга-нізм не використовується.

При приготуванні МПА до мясопептонний бульйону додаю 2-3% Агару, а при приготуванні МТЖ - до мясопептонний бульйону додають харчовий желатин: 10-12% - взимку, 18-20% - влітку.

Складні (спеціальні) поживні середовища готують для культивування мікробів, які не ростуть на звичайних, простих середовищах. Наприклад, яєчну середу Петраньяні використовують для вирощування туберкульозної палички. До складу середовища входять молоко, картопляна мука, пептони, яєчний білок, 2% -ний водний розчин малахітової зелені.

До складних живильних середовищ відносяться диференційно-діаг-ностіческіе середовища (Ендо, Плоскірєва і ін.), Які служать для відмінності одних груп або видів мікробів від інших. Наприклад, середа Ендо складається з МПА, лактози, фуксину основного, обесцвеченного лугом. На цьому середовищі кишкова паличка зростає у вигляді темно-крас-них колоній з металевим блиском, так як зброжує лактозу з утворенням молочної кислоти, яка відновлює обесцве-ченний фуксин. Сальмонели на середовищі Ендо ростуть у вигляді безбарвних колоній. Вони не ферментують лактозу.

Для вирощування анаеробів готують середу Кітт-Тароцці (МППВ), що складається з печінкового бульйону, шматочків печінки на дні пробірки і вазелінового масла, налитого зверху.

Для вивчення здатності мікробів зброджувати цукру в лабораторіях-торіях використовують напіврідкі вуглеводні середовища, що складаються з пептонною поди, 0,2-0,3% Агару, моноуглевода і індикатора.

Протеолітнческіе властивості мікробів (здатність розщеплювати білки) вивчають на желатині, згорнутої кров'яної сироватці і молоці.

Середовища накопичення використовують для придушення одних видів мікробів і створення сприятливих умов для розвитку інших. Найбільш часто в лабораторіях використовують накопичувальні середовища (Кауфмана, Мюллера, селенітовий, хлорістомагніевую М), які затримують ріст гнильних бактерій і не перешкоджають розмножити-ванні) сальмонел.

Для культивування мікробів застосовують також синтетичні-етичні середовища, які включають певні хімічні речовини, необхідні для живлення мікроорганізмів.

Заводи випускають деякі поживні середовища (МПА, середа Ендо і ін.) У висушеному вигляді, що значно полегшує метод їх приготування в лабораторіях.