Питання як проводиться ПЛР діагностика
ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) діагностика починається з паркану біоматеріалу. Як біоматеріалу можуть використовуватися кров, сироватка крові, сеча, слина, кал і інші біологічні рідини. Забраний матеріал, будь то мазок або зішкріб епітеліальних клітин, поміщають в контейнер з розчином і як можна швидше доставляють в лабораторію.
Надалі матеріал підлягає дослідженню на наявність вірусу або іншого збудника.
Дослідження ПЛР проходить в три етапи:
1. виділення фрагментів ДНК (дезоксирибонуклеїнова кислота) з біоматеріалу;
2. ампліфікація ДНК-фрагментів;
3. детекция виявлених в результаті ампліфікації ниток ДНК.
Виділення фрагментів ДНК з біоматеріалу.
Суть цього етапу полягає у виділенні і розщепленні чистої нитки ДНК. При обробці біоматеріалу, додається спеціальна рідина, яка денатурує (видаляє) всі органічні речовини. Таким чином, видаляються жири, полісахариди і залишаються чисті фрагменти ДНК збудника.
Ампліфікація ДНК-фрагментів.
Виділені і «очищені» фрагменти ДНК в подальшому підлягають багаторазовому клонування. Лаборант копіює один фрагмент ДНК і збільшує копії нуклеїнової кислоти в режимі ланцюгової реакції (звідси і назва методу).
В основі даного етапу лежить природний процес реплікації, який відбувається в живому організмі (in vivo), а також створений в лабораторних умовах (in vitro).
Таким чином, накопичується необхідну кількість послідовностей ДНК.
Детекція виявлених в результаті ампліфікації ниток ДНК.
В процесі третього етапу послідовності ДНК обробляються розчином, здатним флуоресцировать (світитися). В процесі світіння виявляється ДНК вірусів. бактерій. грибків.
Діагностика методом ПЛР здійснюється в режимі ланцюгової реакції і триває близько 4 - 5 годин. Результат видається лабораторіями протягом декількох днів.