первинні культури

Клітини, отримані від тварини, і підтримувані в культурі, на-

викликають первинними до тих пір, поки вони не будуть пасеровану (суб

культивовані), т. е. до першого пересіву. Клітини первинної культури

зазвичай гетерогенні і характеризуються малим проліферативним пулом,

але в них найбільш повно представлені типи клітин тієї тканини, звідки

вони були отримані та чітко виявляється експресія ряду властивостей,

властивих даної тканини. Однак первинна культура позбавлена ​​багатьох

клітин, присутніх у вихідній тканини, оскільки не всі клітини спо

собнимі прикріпитися до субстрату і вижити в умовах in vitro.

Первинні культури клітин отримують шляхом стерильного видалення

фрагмента тканини і його механічної або ферментативної (0,01-0,05-

механічної дезагрегації фрагмент тканини подрібнюють до шматочків раз-

мером близько 1 мм, які прикріплюються до субстрату завдяки собст-

кої адгезивности, поверхні субстрату або потоку плазми.

Ферментативна дезагрегації дає більш високий вихід клітин, хоча

метод є селективним, оскільки не всі клітини переживають дис-

асоціації. На практиці найбільш успішне отримання первинних клітин

з багатьох тканин пов'язано з використанням колагенази, що призводить до

зниження розміру експлантов до невеликого кластера клітин, який

прикріплюється до субстрату і розпластується.

Культури первинних клітин легко отримати з багатьох тканин. ка

дещо той час ці клітини експоненціально розмножуються, але потім при-

мірно через 6 місяців швидкість росту культури знижується, а через 10

місяців клітини деградують і гинуть. Це спостерігається приблизно по-

сле 20-50 генерацій (в залежності від віку тканин-джерел пер-52

первинних клітин: з ембріональної - 50, з дорослою - 20). На ранніх ста-

діях клітини залишаються еуплоіднимі, т. е. мають правильним дипло-

ідним набором хромосом, а пізніше вони стають анеуплоїдних. В

деяких випадках окремі анеуплоїдних клітини виживають і про-

довжують розмножуватися, що призводить до встановлення клітинного штам-

ма. Частоту таких трансформацій можна збільшити, обробивши клітини

мутагенами або деякими вірусами.

При успішному встановленні культури первинні клітини починають

розмножуватися і їх необхідно періодично пересівати (субкультіві-

ровать). Субкультівірованія забезпечує можливість продовження

існування культури (отримання лінії клітин), клонування, ис

слідування і збереження клітин, а також отримання більш однорідних

популяцій. Головною перевагою отримання клітинних ліній з

первинних культур є напрацювання великої кількості стабільність

ного матеріалу, придатного для тривалого використання.