Методика шик-реакції на глікоген - оцінка результатів

Методика ШИК-реакції на глікоген - оцінка результатів

Цитохімічні методи переслідують ототожнення хімічних і ферментних речовин в клітинах, використовуючи для цього кольорові реакції. Цитохімічні препарати зберігають клітинну структуру, що допускає виявлення клітин і внутрішньоклітинну локалізацію ісследувмого складеного. Ось чому в гематології віддається перевагу не біохімічним, трудомістким, що руйнують клітинну структуру про що належать до вельми різнорідної клітинної популяції, а цитохімічним способам.

Цитохімія довела, що серед морфологічно однакових клітин є істотні хімічні та ферментативні відмінності.

Глікоген (реакція ШИК) (PAS) - метод Гочкисс - Мак Мінус

Принцип ШИК-реакції. Полісахариди виявляються шляхом реакції, окисляє спиртні групи, які перетворюються в альдегідні групи, і ототожнення останніх шляхом кольорової реакції реагентом Шифф.

Реагенти для ШИК-реакції. 1. Закріпляючий суміш спирт-формалін: 9 частин абсолютного етилового спирту +1 частина 40% формаліну; зберігати при температурі + 4 °.

2. периодную кислота, 1% водний розчин. Розчин безбарвний. Зберігати в пляшці з коричневого скла, в темряві, при лабораторної температурі. Пожовклий розчин непридатний.

3. Реагент Шиффа. Розвести 1 г основного фуксину в 200 мл дистильованої води при температурі кипіння. Базікати 5 хвилин, охолодити до температури 50 °, профільтрувати і додати 20 мл нормальної соляної кислоти. Охолодити до 25 °, додати 2 г метабісульфіту натрію або калію, які повністю забезпечують розчин. Розчин повинен простояти добу в умовах темряви й холоду (+ 4 °). Потім додати 2 г активованого вугілля, поговорити 1 хв. і профільтрувати.
Отриманий фільтрат прозорий і безбарвний. Допускається злегка жовтуватий відтінок; якщо розчин рожевіє, стає непридатним. Зберігати при температурі + 4 ° в герметично закритій пляшці з коричневого скла.

4. Зелений світлий -1% водний розчин.

5. Діастаз: неразжіженная слина людини або 0,1% розчину амилолитического-диастатический ферменту в фізіологічному сольовому розчині.

Техніка проведення ШИК-реакції

1) 10-ти хвилинного закріплення мазків сумішшю спирт-формалін; промивання дистильованою водою;
2) окислення 1% розчином періодної кислоти, 10 хв .; промивання дистильованою водою;
3) забарвлення реагентом Шиффа в накритому посуді, в умовах темряви й холоду, протягом 2 годин; промивання проточною водою;
4) контрастна забарвлення 1% зеленим-світлим протягом 1 хвилини; промивання проточною водою.

Контрольний закріплений мазок піддається інкубації диастазом, 60 хв. в умовах кімнатної температури для вибіркового видалення глікогену. Після промивання дистильованою водою піддається обробці за звичайним методом.

Оцінка результатів ШИК-реакції

Глікоген. забарвленим в багряно червоний-колір, представляється у вигляді зерен або розсіяний. Для контролю реакції використовуються зрілі гранулоцити мазка. Крім глікогену ШИК позитивну реакцію дають і інші речовини вуглеводної природи, такі як, муцин, мукопротеіни, цереброзидів, фібрин. Диференціація глікогену від цих складових здійснюється шляхом попередньої обробки диастазом, після чого глікоген більш не фарбується.

У гранулоцитах глікоген знаходиться в розсіяному вигляді вже на стадії проміелоціти і починає збільшуватися в міру дозрівання. У нормальних умовах лімфоцити негативні або в 20% з них можуть знаходитися кілька дрібних зерен глікогену. Моноцити негативні або мають тонку зернистість.

Інтенсивність забарвлення визначається напівкількісної. У лімфоцитах реакція ШИК відбивається у вигляді глікогену показника, або середнього показника реакції (Астальдо). Нормальний показник глікогену коливається в межах від 0,10 до 0,30. Зазвичай лише у патологічних лімфоцитів спостерігається ступінь навантаження більше 3.

Значилося методу ШИК-реакції.
а) При постановці диференціального діагнозу окремих цитологічних видів гострої лейкемії:
- Мієлобласти і проміелоуіти ШИК-негативні або набувають слабку диффузную забарвлення. Тіла Ауера дають позитивну реакцію, яка слабшає після перетравлення зі слиною.
- Лімфобласти при гострій лейкемії і лимфосаркоме дають різку ШИК-позитивну реакцію у вигляді зерен або великих блоків глікогену.
- Еритробластів при еритреми і гострої еритролейкемію дають різко позитивну розсіяну або зернисту реакцію, на противагу нормальним еритробластах, які ШИК-негативні;
- моноцітоідних б ласти не постійно слабо позитивні, з тонкою зернистістю.

б) З метою встановлення діагнозу і спостереження за ефективністю лікування при хронічній лімфатичної лейкемії: завищений показник глікогену вказує на важку форму захворювання і тяжкий прогноз.
Зростання глікогену в патологічних лімфоцитах не характерно для лейкемії явище, воно пояснюється зростанням метаболічну активність при будь-якому вигляді лімфоїдної проліферації.

в) Для диференціації клітин Гоше від інших макрофагів з накопиченням.