Культуральний метод дослідження

2.1. Бактеріологічний (культуральний) метод - сукупність методик штучного культивування мікроорганізмів на поживних середовищах з метою їх ідентифікації. Сучасні методи вивчення більшості біологічних властивостей бактерій можливі тільки при наявності чистої культури.

Завдання культурального методу:

1) отримання чистої культури будь-якого виду (вару) з мікробної асоціації;

2) ідентіфікаціявиделенной чистої культури,

3) визначення додаткових властивостей, наприклад, чутливості до антибіотиків, вірулентності.

Виконання бактеріологічного методу дослідження дозволяє встановити вид мікроорганізму, виявленого в досліджуваному матеріалі, що важливо в медицині для встановлення причина захворювання і призначення правильного лікування, а в інших областях для розуміння процесів, що відбуваються. Бактеріологічний метод дослідження виконується в кілька етапів:

1) взяття матеріалу і його доставка в бактеріологічну лабораторію;

2) мікроскопія досліджуваного матеріалу. Цей етап часто не виконується, хоча попередня мікроскопія в ряді випадків дає орієнтовні відомості про збудника і дозволяє вибрати необхідні для посіву середовища;

3) обробка досліджуваного матеріалу фізичними або хімічними чинниками з метою видалення або зменшення сторонньої мікрофлори, тобто збагачення досліджуваного матеріалу;

4) посів досліджуваного матеріалу на живильні середовища з подальшою інкубацією (1 - 2 доби) для отримання ізольованих колоній;

5) дослідження колоній. Для вивчення вибирають однорідні ізольовані колонії, розташовані далеко від країв чашки і по штриху петлі, оточують їх рисою, нумерують. Якщо дослідження ведеться не направлено (поліетіологічний процес та ін.), То на підставі результатів візуального огляду вибирають по 2-3 колонії всіх наявних на чашці типів і роблять з них мазки. При дослідженні колоній, що виросли на живильному середовищі відзначають найбільш важливі ознаки - колір колонії, розмір, вологість, форму краю, форму поверхні і інші ознаки, що допомагають в подальшому ідентифікувати виділені бактерії;

6) пересівши обраних колоній на середовища збагачення для отримання мікробної маси, достатньої для ідентифікаційних досліджень. Для цього із залишку колоній, в мазку якої виявлені однорідні за формою і забарвленням бактерії, петлею забирають частину культури і засівають на скошений в пробірці МПА або спеціальне середовище штрихом; в процесі інкубації необхідно отримати суцільний, а не ізольований, зростання колоній;

8) визначення чистоти виросла на скошених середовищах культури шляхом макроскопічного огляду зростання і мікроскопії мазка з нього;

9) ідентифікація виділеної чистої культури і в разі необхідності (на вимогу клініциста, епідеміолога) визначення різних біологічних властивостей;

10) висновок про видову приналежність виділеної культури і її властивості.