Характеристика бактериоскопического методу дослідження - студопедія
Мікроскопічний (бактериоскопический) метод дослідження - сукупність способів вивчення морфологічних ітинкторіальних (здатність забарвлюватися) властивостей мікробів в досліджуваному матеріалі (лабораторна культура, патологічний матеріал, проби із зовнішнього середовища) за допомогою мікроскопії. Основна мета - встановлення етіології хвороби, морфологічна ідентифікація, а також визначивши чистоти виділеної чистої культури. У лабораторній практиці використовують такі типи мікроскопічних препаратів: а) бактеріологічний мазок (препарат-мазок); б) "висяча крапля"; в) "придавлена крапля"; г) тонкий мазок; д) "товста крапля"; ж) препарат-відбиток.
1. Забір матеріалу (гній, харкотиння, кров, сеча, випорожнення, промивні води бронхів і шлунка, ліквор, вміст порожнин носа, вагіни, трупний матеріал і ін.).
2. Транспортування матеріалу.
3. Приготування мікропрепаратів, фіксація і забарвлення (при необхідності).
4. Мікроскопія з оцінкою форми, розмірів, взаємного розташування мікробів і т.д.
Оцінка методу. Метод простий, широко доступний, швидкий, економічний, але мало чутливий
(Близько 10 4 -10 5 бактерій в мл) і специфічний (через схожість морфології
мікроорганізмів різних видів), небезпечний.
2. Світлові мікроскопи. Принципи пристрою простого, фазовоконтрастного, темнопольного, люмінесцентного мікроскопів та їх застосування в мікробіології. Техніка иммерсионной мікро-скопии.
Розміри мікробів, що мають клітинну будову, складають 0.2 - 20 мкм (частіше 0,5 - 10 мкм) і вони легко виявляються в імерсійному мікроскопі. Віруси в багато разів менше. Діаметр найбільших з них, наприклад вірусу натуральної віспи, близько 300 нм, а у самих дрібних становить 20 - 30 нм. Зважаючи на це для виявлення вірусів використовуються електронні мікроскопи. У мікробіологічних дослідженнях застосовують світлові й електронні мікроскопи; методи оптичної та електронної мікроскопії.
Оптичний мікроскоп. Найбільш важливою оптичної частиною мікроскопа є об'єктиви, які за способом використання та ступеня збільшення діляться на сухі і імерсійним. Сухі об'єктиви з відносно великим фокусними відстанню і слабким збільшенням застосовуються для вивчення мікроорганізмів, що мають великі розміри (понад 10 - 20 мкм), імерсійним з фокусною відстанню 1,5 - 3 мм - при дослідженні більш дрібних
При мікроскопії іммерсійним об'єктивом х90 обов'язковою умовою є його занурення в кедрова, персикове або при їх відсутності в вазелінове масло, показники заломлення світла у яких близькі предметного скла, на якому роблять препарати (мазки). В цьому випадку падаючий на препарат пучок світла не розсіюється і, не змінюючи напрямку, потрапляє в іммерсійний об'єктив. Роздільна здатність иммерсионного мікроскопа знаходиться в межах 0,2 мкм, а максимальне збільшення об'єкта досягаємо 1350.
При використанні иммерсионного об'єктива спочатку центрируют оптичну частину мікроскопа. Якщо тубус мікроскопа розсувний, його встановлюють на довжину 160 мм, потім піднімають конденсор до рівня предметного столика, відкривають діафрагму, встановлюють об'єктив х8 і за допомогою плоского дзеркала висвітлюють поле зору. На предметне скло з пофарбованим препаратом наносять краплю олії, в яку під контролем очі обережно занурюють об'єктив, потім, піднімаючи тубус, дивляться в окуляр і спочатку макро-, а потім мікрогвинти встановлюють чітке зображення об'єкта. Після закінчення роботи піднімають тубус, знімають препарат, серветкою видаляють масло з фронтальним лінзи об'єктива, відводять його в бік і опус кают до предметного столика.
Темнопольна мікроскопія. Мікроскопія в темному полі зору заснована на явищі дифракції світла при сильному бічному освітленні зважених в рідини найдрібніших частинок (ефект Тиндаля). Це досягається за допомогою пара-болоід- або кардіоїд-конденсора, який замінює звичайний конденсор в біологічному мікроскопі.
Фазовоконтрастна мікроскопія. Заснована на перетворенні змін по фазі, що виникають при проходженні світлової хвилі через так звані фазові (прозорі) об'єкти, в зміни по амплітуді, які уловлюються оком. За допомогою фазово-контрастного пристосування фазові зміни світлових хвиль, що проходять через об'єкт, перетворюється-щаются в амплітудні і прозорі об'єкти стають видимими в мікроскоп. При цьому вони набувають високу контрастність зображення, яка може бути позитивною або негативною. Позитивним фазовим контрастом називають темне зображення об'єкта в світлому полі зору, негатив ним фазовим контрастом - світле зображення об'єкта на темному тлі.
Для фазово-контрастної мікроскопії використовують звичайний мікроскоп і додаткове фазово-контрастну приспособле-ня КФ-1 або КФ4.
Люмінесцентна (або флюоресцентная) мікроскопія. Заснована на явищі фотолюмінесценції. Первинна (власне) люмінесценція спостерігає-ся без попереднього фарбування об'єкта, вторинна (наведена) виникає після забарвлення препаратів спеці-ними люминесцирующими барвниками - флюорохромами. Люмінесцентна мікроскопія в порівнянні зі звичайними методами має низку переваг: можливістю досліджень-ня живих мікроорганізмів і виявлення їх в досліджуваному матеріалі в невеликих концентраціях внаслідок високого ступеня контрастності.
У лабораторній практиці люмінесцентна мікроскопія широко застосовується для виявлення і вивчення багатьох мікроорганізмів.
3. Типи мікроскопічних препаратів. Етапи приготування фіксованого мазка. Прості мето-ди забарвлення.
У лабораторній практиці використовують такі типи мікроскопічних препаратів: а) бактеріологічний мазок (препарат-мазок); б) "висяча крапля"; в) "придавлена крапля"; г) тонкий мазок; д) "товста крапля"; ж) препарат-відбиток.