Гібридомна технологія, метод отримання моноклональних антитіл
Гібридома - гібридна клітинна лінія, отримана в результаті злиття клітин двох видів: здатних до утворення антитіл B-лімфоцитів, отриманих з селезінки імунізованих тварини (найчастіше миші), і ракових клітин мієломи. Злиття клітин проводиться за допомогою порушує мембрани агента, такого, як поліетиленгліколь або вірус Сёндай. Оскільки ракові клітини мієломи «безсмертні», тобто здатні ділитися велику кількість разів, після злиття і відповідної селекції Гібридома, яка виробляє моноклональні антитіла проти антигену може підтримуватися довгий час.
Найбільш перспективним напрямком є гібридомна технологія. Гібридні клітини (гібридоми) утворюються в результаті злиття клітин з різними генетичними програмами, наприклад, нормальних диференційованих і трансформованих клітин. Блискучим прикладом досягнення даної технології є гібридоми, отримані в результаті злиття нормальних лімфоцитів і мієломних клітин. Ці гібридні клітини мають здатність до синтезу специфічних антитіл, а також до необмеженого росту в процесі культивування. На відміну від традиційної техніки отримання антитіл, гібридомна техніка вперше дозволила отримати моноклональні антитіла (антитіла, які продукують нащадками однієї-єдиної клітини). Моноклональні антитіла високоспецифічні, вони спрямовані проти однієї антигенної детермінанти. Можливе одержання декількох моноклональних антитіл на різні антигенні детермінанти, в тому числі складні макромолекули. Моноклональні антитіла в промислових масштабах отримані порівняно недавно. Як відомо, нормальна імунна система здатна у відповідь на чужорідні агенти (антигени) виробляти до мільйона різних видів антитіл, а злоякісна клітина синтезує тільки антитіла одного типу. Мієломні клітини швидко розмножуються. Тому культуру, отриману від єдиною миеломной клітини, можна підтримувати дуже довго. Однак неможливо змусити мієломні клітини виробляти антитіла до певного антигену. Цю проблему вдалося вирішити в 1975 р Цезарю Мільштейн. У співробітників Медичної науково-дослідної лабораторії молекулярної біології в Кембриджі виникла ідея злиття клітин мишачої мієломи з В-лімфоцитами з селезінки миші, імунізованих якихось специфічнимантигеном. Утворені в результаті злиття гібридні клітини набувають властивостей обох батьківських клітин: безсмертя і здатність секретувати величезна кількість якого-небудь одного антитіла певного типу (рис. 4.5). Ці роботи мали величезне значення і відкрили нову еру в експериментальній імунології.
У 1980 р Карло М. Кроче з співробітниками (США) вдалося створити стабільну, яка продукує антигени, внутрішньовидову людську гібридів шляхом злиття В лімфоцитів мієломний хворого з периферійними лімфоцитами від хворого з підгострим паненцефаліта. Основні етапи отримання гібридомної техніки наступні. Мишей імунізують антигеном, після цього з селезінки виділяють спленоцитах, які в присутності поліетиленгліколю зливають з дефектними
пухлинними клітинами (зазвичай дефектними по ферментам запасного шляху біосинтезу нуклеотидів - гипоксантина або тіаміну). Далі на селективної середовищі, що дозволяє розмножуватися тільки гібридним клітинам, проводять їх відбір. Живильне середовище зі зростаючими Гібридоми тестують на присутність антитіл. Позитивні культури відбирають і клонують. Клони ін'єктують тваринам з метою утворення пухлини,
продукує антитіла, або нарощують їх в культурі. Асцитної рідина миші може містити до 10-30 мг / мл моноклональних антитіл. Гібридоми можна зберігати в замороженому стані, і в будь-який час вводити дозу такого клону в тварину тієї лінії, від якої отримані клітини для злиття. В даний час створені банки моноклональних антитіл. Антитіла застосовують в різноманітних діагностичних і терапевтичних цілях, включаючи протиракову лікування (таблиця 4.1). Ефективним способом застосування моноклональних антитіл в терапії є зв'язування їх з цітоксіческімі отрутами. Антитіла, кон'юговані з отрутами, відстежують і знищують в макроорганизме ракові клітини певної специфічності.
Таким чином, роботи по отриманню нових моноклональних антитіл з метою створення на їх основі лікарських і діагностичних засобів дуже перспективні. Вони дозволять вивести практичну медицину на якісно новий рівень. Гібридомна технологія стала проривом в розробці препаратів для лікування злоякісних новоутворень, вірусних, аутоімунних і багатьох інших захворювань. Терапія за допомогою МА ефективна, дуже специфічна, тобто націлена тільки на певний патологічний механізм, який є причиною захворювання, і, отже, порівняно безпечна. Вже сьогодні 20% розроблюваних біофармацевтичних препаратів є продуктами гібридомної технології. Всього в світі на різних стадіях розробки знаходиться понад 350 лікарських засобів, що містять МА, 70 з них проходять клінічні випробування.