фенотипування еритроцитів

МЕНШ імуногенність АНТИГЕНИ ЕРИТРОЦИТІВ

Фенотипування еритроцитів за антигенами До і з

Найбільш вираженими антигенними властивостями серед мінорних антигенів еритроцитів мають фактори Келл (К) і з (система Резус). Фактор Келл стоїть на другому місці після фактора D в шкалі трансфузійної небезпечних антигенів еритроцитів. Третє місце займає фактор с.

Індекс сенсибілізації населення (відсоток осіб з підвищеним ризиком посттрансфузійного ускладнення) до обох зазначених факторів в даний час високий.

В абсолютних цифрах сенсібілізаціонного індекс по антигену До системи Келл з урахуванням 10 попередніх років становить за розрахунковими даними 8-10 млн чоловік, тобто приблизно 6-7% всіх потенційних реципієнтів на дану точку відліку.

З тим, щоб уникнути посттрансфузійні ускладнення по антигену К, необхідно видавати в лікувально-профілактичні установи тільки К-негативні еритроцити. В кабінетах, відділеннях і станціях переливання крові доцільно проводити визначення антигену К, як обов'язкове, у всіх донорів поряд з групою і резус-фактором, після чого відбирати К-позитивні зразки крові, не допускаючи їх до видачі для переливання. К-позитивним донорам доцільно рекомендувати інший вид донорства (плазми, тромбоцитів, лейкоцитів і ін.), Але не еритроцитів.

Визначення антигену К в еритроцитах виробляють за допомогою загальноприйнятих методів дослідження:
  1. Непряма реакція Кумбса.
  2. Желатиновий метод в пробірках.
  3. Експрес-метод на площині з сироваткою анти-К універсальної ( "Гемостандарт", Київ).

Для дослідження експрес-методом використовують свіжі (не більше двох днів зберігання), неотмитие або відмиті еритроцити, взяті з дна пробірки після відстоювання від сироватки (3-тя фракція крові), плазми з консервантом або фізіологічного розчину. Використовують також цільну кров, узяту з проколу пальця безпосередньо перед дослідженням.

Хід визначення:
  • на площину поміщають дві краплі (1 мл) сироватки анти-К і краплю еритроцитів в кількості 1/3 обсягу взятої сироватки;
  • краплі перемішують скляною паличкою і при плавному періодичному погойдуванні пластинки спостерігають за ходом реакції протягом 5 хв.

При позитивному результаті аглютинація еритроцитів з'являється до 30 с - 1 хв і надалі посилюється, при негативному результаті аглютинація відсутня. Після закінчення 3-4 хв в реагує суміш додають 1-2 краплі фізіологічного розчину для зняття можливої ​​неспецифічної агрегації еритроцитів і продовжують спостереження до закінчення 5 хв, після чого реєструють результат.

Поширеність антигену з (система резус) становить близько 80%. Близько 20% людей не містять антигену з і є гомозиготними по аллельному антигену С. Відповідно, цим пацієнтам в 80% випадків переливають еритроцити, що містять антиген с, що веде до сенсибілізації і ризику розвитку посттрансфузійного ускладнення. Індекс сенсибілізації населення до антигену з становить близько 32%.

З тим, щоб зменшити індекс сенсибілізації населення і уникнути посттрансфузійних ускладнень, зумовлених несумісністю з цього антигену, доцільно у кожного резус-позитивного реципієнта визначати з антиген і при його відсутності переливати реципієнту кров донорів, гомозиготних по антигену С, тобто з-негативних. На станціях і у відділеннях переливання крові доцільно мати резервну групу таких донорів або запас з-негативною еритроцитної маси.

Антиген з визначають зі стандартною сироваткою анти-с ( "Гемостандарт", Київ) тими ж методами, що і антиген D. Для виявлення антигену С доцільно використовувати Цоліклони "Анти-С-супер" (моноклональні анти-С-антитіла) ( "Гематолог ", Київ). Цоліклони "Анти-С-супер" не містить антитіл інших специфичностей і не вимагає проведення контролю розчинника.

Фенотипування еритроцитів за антигенами системи Lewis

Виявлення Lewis-антигенів Lе а. Lе b ферментним методом з використанням неповних стандартних антитіл анти-Lе (а), анти-Lе (L) ( "Гемостандарт", Київ) складається з приготування робочого ферментного розчину, обробки (ензімірованія) цим розчином досліджуваних і стандартних (контрольних) еритроцитів і постановки реакції аглютинації ензімірованних еритроцитів.

Хід визначення:
  1. Приготування робочого ферментного розчину.

Для приготування робочого ферментного розчину зазвичай використовують протеазу-С (комплекс протеаз, які продукуються культурою Arc. Chrysogenum).

Можливо також використання будь-якої іншої серологічно активної протеази мікробного (субтілізін, проназа) або рослинного (папаїн, бромелін) походження.

Необхідний обсяг 0,1% ферментного розчину готують шляхом розчинення протягом декількох хвилин при кімнатній температурі навішування використовуваного ферментного препарату в фізіологічному розчині (наприклад, 10 мг ферменту розчиняють в 10 мл фізрозчину). Розчин мікробних протеаз готовий для використання відразу ж після розчинення ферменту. Для розвитку ферментативної активності розчину папаїну його витримують 1 год при кімнатній температурі після розчинення препарату. Придатність приготованого розчину мікробної протеази (протеази-С), що зберігається при 4-8 ° С, - 1 тиждень, розчину папаїну - 48 ч. Порошкоподібні ферментні препарати при 4-8 ° С зберігають свою активність протягом кількох років.

  • Ензімірованіе еритроцитів:
    • досліджувані і стандартні (Lе а + b-. Lе а-b +) еритроцити двічі відмивають фізіологічним розчином;
    • до 1 обсягу осаду відмитих еритроцитів додають 5 обсягів ферментного розчину (наприклад, до 3 краплях еритроцитів додають 15 крапель ферментного розчину);
    • еритроцити і ферментний розчин перемішують;
    • пробірки з інгредієнтами поміщають в сухоповітряний термостат з температурою 37 ° С на 45 хв або на 30 хв у водяну баню з тією ж температурою;
    • після ензімірованія еритроцити двічі відмивають від ферментного розчину;
    • готують 5-7,5% робочу суспензію ензімірованних еритроцитів у фізіологічному розчині.
  • Постановка реакції аглютинації ензімірованних еритроцитів:
    • для кожного зразка досліджуваних і стандартних (контрольних) еритроцитів на площину поміщають по 1 краплі сироватки анти-Lе (а) і анти-Lе (L);
    • до поміщеним на площину реагентів додають по 1 краплі ензімірованних еритроцитів;
    • реагенти перемішують;
    • инкубируют (в спокої) 10 хв при кімнатній температурі;
    • враховують результати реакції аглютинації ензімірованних еритроцитів неозброєним оком або за допомогою 4-кратної лупи (при хорошому природному або достатній штучному освітленні, при обережному погойдуванні площини) - за наявністю або відсутністю аглютинації.

    • Результат враховується як істинний після перевірки контрольних проб, тобто при наявності аглютинації з позитивним контролем і її відсутності з негативним контролем.

    Поширеність фенотипів системи Lewis у донорів на північно-западеУкаіни: Lе а-b- - 20%, Lе а + b- - 3-5%, Lе а-b + 70%, Lea а + b + - зустрічається рідко.

    всього сторінок: 10