Діагностика хламідіозу метод іммунофлюресценціі
Ці методи засновані на виявленні антигенних субстанцій хламідій в епітелії та інших тканинах шляхом обробки препаратів специфічними антитілами. Антитіла діагностичної антихламідійний сироватки з'єднані з будь-якої міткою - люминесцирующей (ФИТЦ-антитіла) або ферментної (ензим-мічені антитіла).
Пряма імунофлюоресценція (ПІФ)
Цей метод передбачає пряме виявлення антигенів хламідій. При люмінесцентної мікроскопії включення хламідій визначаються у вигляді зеленої або жовто-зеленої флуоресценції включень на коричнево-помаранчевому тлі цитоплазми клітин. Включення можуть мати зернисту гомогенну або змішану структуру.
- Гостра фаза захворювання.
- Хронічна фаза захворювання.
- Встановлення етіології хронічного інфекційного процесу урогенітального тракту.
- Вагітність з обтяженим акушерським анамнезом.
- Безпліддя неясного генезу.
Діагностична інформативність ПІФ пов'язана з тим, що з її допомогою виявляються не тільки корпускулярні, а й розчинні антигени хламідій. Цей метод не залежить від можливої зміни тинкторіальних властивостей мікроорганізму в процесі захворювання і лікування. ПІФ-метод є найважливішим скринінгове методом діагностики урогенітального хламідіозу.
Його чутливість і специфічність при використанні моноклональних антитіл становить відповідно 65-90% і 85-90%. При оцінці результатів слід враховувати, що тільки показники внутрішньоклітинної флюоресценції можуть оцінюватися як позитивного результату цього тесту при використанні поліклональних антихламідійний антитіл, при використанні моноклональних - результат вважають за наявності 10 ЕТ в користь зору.
Cоскобние препарати готують також, як і для Цітоскопіческій досліджень.
Випускають діагностичні набори, що містять моноклональні антитіла для ПІФ, наступні фірми: Syva, Difco, Kallastad, Bartrels, Boots celltech, California Integrated Diagnostics, Orion Diagnostica. Реагенти фірм Syva, Difco, Kallastad представляють собою мічені Фітц моноклональні антитіла до основного білка зовнішньої мембрани хламідій, а реагенти інших фірм - моноклональні антитіла до родоспеціфіческому хламидийному ліполісахаріду (ЛПС). ВУкаіни ЗАТ "Ниармедик плюс" при НІІЕМ ім. Н.Ф. Гамалії РАМН випускає моноклональні антитіла до ЛПС хламідій, які успішно конкурують з продукцією іноземних фірм за якістю продукції. Це набір "Хламоноскрін" для визначення моноклональних антитіл до родоспеціфіческому ліпополісахарідние антигену і набір "Хламоноскрін-2" для визначення моноклональних антитіл до видоспецифічні білкового антигену хламідії трахоматіс. Набори мають ФС 42-359598 і реєстраційне посвідчення МінздраваУкаіни 93/270/9.
Моноклональні антитіла відрізняються один від одного по спричиненої яскравості світіння, постійності виявляються форм ЕТ і ступеня специфічності. Для діагностики хламідій цим методом необхідний люмінесцентний мікроскоп.
В цілому, метод ПІФ відповідає критеріям високої чутливості і специфічності, але вимагає виконання досвідченим, компетентним лабораторним працівником.
Висококваліфікована експертна оцінка методом ПІФ рідко буває доступною, тому середня чутливість його знижується. Метод недостатньо чутливий і для стабільного визначення малих кількостей ЕТ. До того ж неможливо перевірити і негативні результати, і, отже, виявити серед них хибнонегативні, що призводить до зниження чутливості.
Непрямий метод іммунофлюресценцііі
Непрямий метод іммунофлюресценціі застосовують в тих випадках, коли немає в наявності Фітц-кон'югату антихламідійний антитіл. У цих випадках приготований тим же методом, що і для ПІФ препарат з клінічних проб обробляють спочатку антихламідійний антитілами, отриманими шляхом імунізації хламідіями овець, кролів, мишей або інших тварин, а потім другий сироваткою, специфічною для виду тварини, яке було імунізовані хламідіями. Антитіла другий сироватки кон'юговані з ФИТЦ. Показання до застосування і специфічність даного методу збігаються з ПІФ.