Денатурація оборотна - довідник хіміка 21
Денатурація може бути частково оборотною, а відновлені первісні властивості - кількісно відмінними. [C.211]
В основу роботи по виділенню і очищенню білків покладені такі властивості білків. як розчинність, наявність заряду. молекулярна маса. На відмінностях в розчинності білків засновані методи висолювання, а саме осадження білків сульфатом амонію або хлоридом натрію. Таке осадження являє собою оборотну денатурацію, так як білки при додаванні води знову розчиняються і не втрачають нативних властивостей. [C.24]
При нагріванні білків вище температур, властивих живим організмам. або при їх приміщенні в незвичайні кислотні або основні умови білки поступово втрачають характерну для них третинну або вторинну структуру. В цьому випадку білок втрачає свою біологічну активність. і говорять. що він денатурируется. Якщо денатурація протікає при дуже м'яких умовах, вона часто буває оборотною, тобто при поверненні до нормальних умов біологічна активність білка [c.449]
При високій концентрації сечовини або гідрохлориду гуанідину в водному розчині відбувається повна денатурація. яка в ряді випадків може бути оборотною після видалення денатурирующего речовини за допомогою діалізу. Зазначені денатурирующие агенти знаходять широке застосування, оскільки можна досягти їх високих концентрацій у водних розчинах. Невпорядкованість викликають також деякі солі [23] і (в обмеженій мірі) детергенти, наприклад додецилсульфат [24]. Більш широкі узагальнення в цій галузі навряд чи можливі, оскільки для ряду амінокислот з функціональними групами в бічних радикалах спостерігалися несподіванки, наприклад, пoлі (l-бeнзіл- -гі тідін) в розчинах, що містять невеликі кількості простих мінеральних кислот, бере неупорядковану конформацию, тоді як в присутності стехиометрического кількості хлорного кислоти він існує у вигляді а-спіралі. Крім того, повідомлялося [26], що присутність додецилсульфата збільшує впорядкованість ферменту еластази. починаючи з досить низького рівня видалення детергенту діалізом призводить до глобулярні білки в кращою р-формі. [C.433]
Як показали дослідження, високомолекулярні речовини. виділені з розчину висолюванням. після відмивання їх від електролітів можуть бути знову переведені в розчин (явище можна зупинити). Колоїди, які при усуненні фактора, що викликав коагуляцію, здатні переходити зі стану гелю в стан золю, звуться оборотних колоїдів. Однак високомолекулярні речовини можуть при певних умовах осідати і необоротно. Таке необоротне осадження високополімеров, зокрема білків, йод впливом високої температури. цри впливі концентрованих кислот і лугів, дубильних речовин. променевої енергії називається денатурацією. При денатурації відбувається не тільки осадження полімерів. але і зміна їх хімічної природи. Білки при денатурації стають нерозчинними і в більшості випадків втрачають здатність до набухання. [C.383]
Численні спостереження показують, що денатурація оборотна. Багато білки, такі, як гемоглобін, сироватковий альбумін. трипсин і хімотрипсин. денатуровані і потім зберігаються в розчині при низькій температурі. знову набувають (іноді після видалення денатурирующего агента) все властивості вихідного білка, а саме розчинність, спектр, схильність до кристалізації, маскування деяких груп 8Н і 8-8 і ферментативну активність. У деяких випадках можна було навіть вивчити рівновагу між природним і денатурований білком. Однак в інших випадках після денатурації відбувається більш глибоке перетворення молекули, причому повернення до вихідного стану стає неможливим (так, наприклад, денатурація яєчного білка незворотна). [C.440]
У цих випадках відбувається так звана агрегація денатурованого білка - явище надзвичайно поширене і багаторазово вивчали. У межі агрегація призводить до повної втрати розчинності - випадання пластівців білка з розчину, а в концентрованих розчинах - до желатинування. Типовим прикладом білка, сильно агрегує при денатурації, є яєчний альбумін. У деяких білках явища денатурації оборотні. Зазвичай це білки сильно вулканізованої дисульфідними зв'язками. [C.85]
Ви також визначте, оборотна чи денатурація альбуміну. викликається зміною pH. [C.457]
Так, вивчалася [14] оптична активність полі- -глут-амінової кислоти і виявилося, що при зміні pH від 7,0 до 4,5 відбувається оборотна зміна [а] 54б від -120 ° до -8 °. Це зіставляється зі зміною оптичного обертання. спостережуваним при денатурації деяких білків. [C.638]
Явища оборотної денатурації білків протікають і в живому організмі можливо, що з цими процесами Рис. 92. Зміна форми поліпептидного пов'язано взаємне перетворений -ланцюга при переході білка з нативного нце активних і неактивних (а) стану через проміжне (б) форм ферментів І відпо-к денатурированной формі (в) чих гормонів, а так- [c.212]
При граничних значеннях pH молекула білка починає розмотуватися і, як кажуть. втрачає свої природні властивості. Цей процес може бути або оборотним, або незворотних залежно від природи білка і його обробки. Денатурація (втрата природних властивостей) часто незворотна, так як вона супроводжується значним зменшенням розчинності, і білок осідає з розчину. Білки можна також денатурувати нагріванням, навіть при нейтральних pH, або додаванням сечовини (НгИ) 2С0 або інших речовин. які послаблюють зв'язку, які утримують білок в глобулярної формі. [C.603]
Денатурація. Макроструктура білка визначається вельми крихкою рівновагою між різними силами тяжіння і відштовхування, які діють між цим биополимером і навколишнього його водним середовищем. Варто тільки порушити цю рівновагу, як вся структурна організація поліпептиду, крім первинної. зникне ппимі словами, відбудеться денатурація. Залежно від ступеня порушення структури і від природи білка денатурація може бути або оборотної, або незворотною. Класичним прикладом незворотною денатурації є коагуляція яічіого білка при варінні яєць, коли яєчний альбумін (білок) зазнає теплову денатурацію. [C.412]
Крайній випадок конформационно про зміни - денатурація білків. яка може бути викликана нагріванням або обробкою різними реагентами. наприклад сильними кислотами і підставами, сечовиною. гуанідінгідрохлорідом і додецилсульфатом натрію. Денатурація призводить до розгортання молекули білка. і він переходить в більш-менш разупорядоченності стан (тут вже майже немає ні спіралей, ні (3-шарів, ні будь-яких інших типів регулярної укладання ланцюга). У денатурованому стані амідні групи пептидного ланцюга утворюють водневі зв'язки з оточуючими їх молекулами води таких водневих зв'язків значно більше, ніж внутрішньо молекулярних. Специфічна біологічна активність білка при денатурації втрачається, змінюються і фізичні властивості. наприклад змінюється константа седиментації. в'язкість і поглинання світла. Легкість, з якою виро ходить денатурація білка. і той факт, що денатурація в принципі оборотна. свідчать про те, що відмінності в енергії між згорнутими конформаціями і відкритої конформацией статистичного клубка невеликі. [c.105]
Другим прикладом кооперативного процесу служить оборотна денатурація згорнутих поліпептидних ланцюгів. Значення pH середовища розчинів деяких білків можна довести приблизно до 4 додаванням кислоти без протонирования при цьому груп. схованих всередину білкової глобули. для яких р / С> 4. При подальшому додаванні невеликої кількості кислоти відбувається протонирование якийсь менш основної групи. що викликає розгортання поліпептидного ланцюга і робить доступними для протонирования раніше заховані в структурі більш основні групи. Таким чином, зв'язування протона в даному випадку є кооперативним процесом. причому, як і для тіаміну, причиною кооперативності служить конформационное зміна. викликається протонуванням певної групи. [C.263]
Що стосується розчинних глобулярних білків (наприклад, гемоглобіну, інсуліну, гамма-глобуліну. Яєчного альбуміну), то питання про характер вторинної структури ще складніше. Накопичуються дані, згідно з якими і в цьому випадку а-спіраль грає ключову роль. Подібні довгі пептидні ланцюга не однакові за структурою по всій довжині окремі їх ділянки згорнуті в спіралі і є відносно жорсткими інші ділянки утворюють петлі, скручені випадковим чином і досить рухливі. Встановлено, що при денатурації білка спіральні ділянки розкручуються і ланцюг в цілому набуває невпорядковане будову. (Однак досвід показує, що в певних умовах розкручування і виникнення спіралі можуть бути оборотними процесами білок повертається до вихідної вторинної структурі. Оскільки це розташування є найбільш стабільним для ланцюга з даної послідовністю амінокислот.) [C.1061]
Рівноважна трактування денатураціонние явищ, строго кажучи, може бути застосована лише до оборотної денатурації. Видимий денатурація в більшості випадків частково або повністю [c.248]
Такого роду обчислення можливо, звичайно, тільки в тому випадку, коли денатурація оборотна і між нативним і денатурований білками встановлюється стан оборотного рівноваги. Кунітц застосував вказаний метод для обчислення Л Я обратілмй денатурації інгібітора трипсину (білка соєвих бобів) і знайшов її рівною +57 ТОВ кал на 1 моль білка [188]. Інший метод. використаний Кістяківським. заснований на калориметричному визначенні теплот наступних двох реакцій [c.158]
Денатурація і ренатівація ДНК. Гібридизація ДНК - ДНК і ДНК - РНК. Дволанцюжкові структури ДНК при нагріванні, екстремальних значеннях pH, обробці сечовиною можуть переходити в форму невпорядкованих клубків - денатурований. Молекули нуклеїнових кислот максимально поглинають ультрафіолет при 260 нм за рахунок поглинання азотистих основ. Розчин нативной ДНК має при 260 нм оптичну щільність на 40% нижче оптичної щільності суміші нуклеотидів -. гіперхромний ефект. Тому про денатурації ДНК судять по збільшенню Е250- При нагріванні поглинання при 260 нм зростає у вузькому діапазоні температур (точка плавлення 80-85 ° С). Денатурація оборотна, якщо залишилися спіраль ділянки ДНК. Відновлення структури ДНК після видалення денатурирующего фактора (за рахунок комплементарного спаровування підстав нуклеотидів) називається ренатіваціей ДНК. На явищі денатурації ренатіваціі заснований метод гібридизації. [C.295]
Мал. 4.3. Схематичне зображення конформації нативного білка і процесу його денатурації. У відповідних умовах денатурація оборотна. Букви N і С відносяться відповідно до КНа- і СООН-коіцевим залишкам.
Денатурація оборотна дшке після повного поділу двох ланцюгів. Якщо інкубувати комплементарні ланцюга при температурі приблизно на 25 ° С нижче температури плавлення вихідного дуплексу, то вони починають реассоцііровать і при певних умовах утворюють вихідну спіраль. Цей процес називається Ренату-рацією або відпалом. [C.12]
Подібні копформаціоіние переходи лізоциму виявлені також в ряді робіт іншими методами. Так, в роботі [157] показано, що оборотний конформаційний перехід лізоциму в лужному області pH контролюється ионогенной групою з рК 9,9. В роботі [158] було знайдено, що прп низьких значеннях pH лізоцим зазнає оборотну денатурацію, швидкість якої залежить від іопізаціі карбоксильних груп вільного ферменту з рК в області 1,4-1,8. За даними робіт ([159, 160]) карбоксильная група з аномально низьким значенням рК Дивитися сторінки де згадується термін Денатурація оборотна. [C.194] [c.151] [c.593] [c.316] [c.249] [c.119] [c.54] Біохімія Том 3 (1980) - [c.263]
Основи біологічної хімії (1970) - [c.152]
Іммобілізовані ферменти (1987) - [c.128]