бактеріологічні методи
мікроскопія мазка
Мікобактерії туберкульозу мають вигляд тонких, злегка вигнутих паличок різної довжини з потовщеннями на кінцях або посередині, розташовуються групами і поодинці (рисунок 1, а) Пофарбовані за Цілем-Нільсеном мазки микроскопируют з иммерсионной системою не менше 10 хв.
люмінесцентна мікроскопія
До недоліків методу ЛМ слід віднести значно вищу вартість люмінесцентного мікроскопа, при процедурі окрашіванія- дотримання і корекція pH мазка, а також звільнення мікобактерій в діагностичному матеріалі (особливо в мокроті) від навколишнього їх слизу, яка перешкоджає проникненню флуоресцентного барвника в мікробну клітину. Тому недоцільно використання ЛМ для нативної мокротиння, але застосовувати цей метод рекомендується при дослідженні мазків, приготовлених після центрифугування з осаду матеріалу, обробленого для культурального дослідження і нейтралізованого після деконтамінації. Тому метод ЛМ слід застосовувати в бактеріологічних лабораторіях, де культуральное і мікроскопічне дослідження може бути вироблено з однієї і тієї ж порції діагностичного матеріалу.
При гістологічному або цитологічному дослідженні іноді можна виявити характерні для туберкульозу клітини, які є результатом захисної реакції організму на впровадження туберкульозної палички. Наявність в цитограмме гігантських клітин Лангханса з переконливістю вирішує діагноз туберкульозу. Ці клітини мають дуже великі розміри (80 - 90 мкм і більше в діаметрі). Цитоплазма пофарбована в сіро-блакитний колір. За її периферії розташоване в ряд велику кількість ядер (до 20), розташованих у формі кільця (рисунок 1, в).
Іншою ознакою туберкульозу є присутність в препараті так званих епітеліоїдних клітин, з яких і розвиваються клітини Лангханса. Це відбувається при збільшенні кількості ядер без поділу цитоплазми, яка тільки збільшується в розмірах (рисунок 1, г).
Мікроскопія дозволяє швидко отримати результат, але має низьку чутливість і специфічність, неможливістю диференціації кислотостійких мікобактерій.
Малюнок 1 - Мікобактерії туберкульозу
а - метод забарвлення за Цілем-Нельсену
б - метод люминисцентной мікроскопії
в - клітини Лангхаса
г - епітеліоїдних клітини
культуральний метод
Найбільш поширеним методом виявлення мікобактерій туберкульозу в нашій країні є культуральний метод. Це "золотий стандарт" бактеріологічної діагностики туберкульозу, так як чутливість методу істотно вище мікроскопічного і дає можливість отримати чисту культуру мікобактерій для її подальшої ідентифікації і дослідження лікарської стійкості. Цей метод дає позитивні результати при наявності в досліджуваному матеріалі від 20 до 100 життєздатних мікробних клітин в 1 мл. Однак він трудомісткий і тривалий у зв'язку з тим, що мікобактерії туберкульозу ростуть дуже повільно і їх виявлення може бути зареєстровано лише через 3 тижні культивування.
Історично склалося, що поживні середовища на яєчній основі (Левенштейна-Йенсена, Фінна-2, Огава, Анікіна, "Нова", Попеску) набули найбільшого поширення серед щільних поживних середовищ, що застосовуються для виділення МБТ. Посів матеріалу на середу Левенштайна-Йенсена проводять у бактеріологічній лабораторії. Зростання перших колоній на класичних середовищах відзначають через 4 - 8 тижнів. Однак з'явилися в останні роки агарові середовища Міддлбрука (7Н10, 7Н11) дозволяють швидше виявити ріст мікобактерій (від двох до чотирьох тижнів) і забезпечують найкращі можливості для вивчення морфології колоній, ніж на яєчних середовищах. Недоліком щільних поживних середовищ є необхідність інкубації посівного матеріалу в термостаті з вуглекислим газом, тому щільних середовища вУкаіни практично не застосовуються.
Слід зазначити, що в зв'язку з високою вибірковістю різних штамів мікобактерій і потребою в повноцінних білках досі немає універсальної живильного середовища. здатної замінити всі інші. У Наказі № 109МЗ Україна для посіву діагностичного матеріалу на МБТ рекомендується використовувати по одній пробірці міжнародної живильного середовища Левенштейна-Йенсена і Фінна-2. Однак практика показує, що крім зазначених середовищ доцільно використовувати і будь-яку з додаткових, а посів на три пробірки живильного середовища також підвищує ефективність культуральної діагностики.
Для повноцінної культуральної діагностики туберкульозу необхідно мати відповідні приміщення та обладнання. Особливо важлива наявність центрифуги і антіаерозольной захистом і здатністю забезпечити прискорення 3000g. А також шаф біологічної безпеки для запобігання внутрішньолабораторного інфікування.
Основним недоліком культуральної діагностики туберкульозу є тривалість дослідження - від трьох тижнів до трьох місяців. Тому залишаються актуальними подальші дослідження з розробки методів прискорення росту мікобактерій.
системи BACTEC
Культуральная діагностика туберкульозу переживає в даний час принципові зміни, пов'язані з впровадженням в практику повністю автоматизованих систем культивування МБТ. Головна відмінність цих методів - застосування рідких поживних середовищ для культивування з подальшою радіометричної (BACTEC 460), колорометріческой (Mb-Bact, Вас-tALERT) і люмінесцентної детекцией зростання (BACTEC MGIT 960). Зростання МБТ на рідкому поживному середовищі в цих системах вдається виявити вже через 1 - 2 тижні в залежності від їх початкової кількості в діагностичному матеріалі. Частота виявлення мікобактерій так само трохи вище, ніж на щільних поживних середовищах. Автоматизовані системи BACTEC з використанням відповідних флаконів, що містять різні протитуберкульозні препарати, дозволяють скоротити час дослідження лікарської стійкості мікобактерій до 10 - 14 діб.
З перерахованих автоматизованих систем найбільш ефективна в даний час система BACTEC MGIT 960BD. Флакони MGIT з рідким живильним середовищем 7Н9 містять в придонному частини під силіконом флуоресцентний індикатор, "погашений" високими концентраціями кисню. При наявності росту мікобактерій в процесі поглинання кисню індикатор починає світитися, реєстрація флуоресценції в Сісіеми BACTEC MGIT проводиться автоматично. Використання флаконів MGIT можливо і "вручну", тоді реєстрацію світіння виробляють за допомогою трансілюмінатора на флаконах MGIT становить 11 діб.
Основним недоліком BACTEC MGIT, як і інших систем BACTEC, є висока вартість обладнання (до 100000 доларів США) і флаконів з живильним середовищем - посів однієї проби діагностичного матеріалу варто до 400 рублів.
Посів на L-форми мікобактерій
Так звані дефектні по клітинній стінці L-форми мікобактерій та інших інфекційних патогенів є результатом мінливості і основним видом персистирования, тобто переживання в несприятливих умовах. Посів на L-форми особливо ефективний при позалегеневий туберкульоз, оскільки вегетація МБТ у вогнищах ВЛТ при підвищеному ацидозі і Анаеробіоз призводить до зниження їх життєздатності і ферментативної активності.
Діагноз не може бути поставлено лише на підставі виявлення L-форм мікобактерій, але їх виявлення, особливо при верифікації методом ПЛР, є вагомим аргументом на користь туберкульозної природи захворювання. В осередках позалегеневого туберкульозу спостерігається рання L-трансформація мікобактерій, тому їх виявлення дозволяє поставити діагноз на початкових стадіях захворювання.
Інформація загального та комерційного характеру
Інформація наукового характеру
- Уреаплазмоз: діагностика, збудники, профілактика - сучасний погляд
- Лабораторна діагностика гонореї
- Сучасна лабораторна діагностика туберкульозу легенів
- Діагностика мікоплазмозу: тепер просто і дешево
- Антибіотики для лікування уреаплазмоза і мікоплазмозу
- Хромогенні поживні середовища
- Лабораторні методи діагностики трихомоніазу (огляд літератури)
реєстраційні посвідчення
- Набір дисків для визначення чутливості до протимікробних препаратів - 1 (НД-ПМП-1)
- Набір реагентів "Діагностикум еритроцитарний коровий антигенний сухий для реакції пасивної гемаглютинації (РПГА)"
- Набір реагентів для візуального виявлення Mycoplasma hominis (мікоплазми-50)
- Набір реагентів для візуального виявлення Ureaplasma urealyticum (УРЕАПЛАЗМА-50)
ФБУН НДІ епідеміології
і мікробіології імені Пастера
Відділ нових технологій