Проводка »зразків для мікроскопічного дослідження

Глутаровий альдегід - диальдегид, реагує з аміногрупами, сульфгідрильними групами і, можливо, з ароматичними циклічними структурами. ''Сшівает'' молекули сильніше, ніж формальдегід, в зв'язку з цим менш кращий ?? ен для імуногістохімії. Фіксатори на базі ГА повільніше проникають в тканини, ніж формалін, в зв'язку з цим можуть виникнути артефакти на базі дифузії розчинних білків і порушення структури.

В сучасних мікроскопічних дослідженнях використовують різноманітні фіксатори, виходячи із завдань дослідження.

Отже, після фіксації ми маємо зразок, просочений водним розчином фіксатора. Для заливки в парафін, який не змішується з водою, потрібно позбутися від води і просочити зразок парафіном. Для цього проводять зневоднення зразка в розчинах етилового спирту зростаючої концентрації (від 30% до абсолютного), потім витримують в суміші абсолютного спирту з ксилолом або в ізопропиловому (бутиловом) спирті, потім -в ксилоле, суміші ксилолу з парафіном і, нарешті, в парафін ?? е. Просочення парафіном проводиться при температурі 56С. Розігрітий зразок поміщають в формочку і заливають розігрітим парафіном. Після затвердіння зразок монтують на підставку і блок готовий для різання. Потрібно мати на увазі, що для гістологічних цілий ?? їй підходить не кожен парафін, існують свої особливості його підготовки. Від якості парафіну багато в чому залежить якість зрізів.

Для проводки матеріалу використовують щільно закривається посуд, щоб не було випаровування розчинів. При ручному проводці зразки перекладають з розчину в розчин, і проводка займає, виходячи з величини зразків, від доби до тижня. У лабораторіях зазвичай використовують автомати різної модифікації, в яких відбувається обертання судин, ĸᴏᴛᴏᴩᴏᴇ забезпечує перемішування рідини. Час проведення скорочується до доби. Існують прискорені схеми проводки.

Готові парафінові блоки можуть зберігатися необмежений час. Парафінові зрізи готують на мікротомів за допомогою сталевого або (рідше) скляного ножа Товщина зрізів залежить від властивостей самого парафинового блоку, тканини і від моделі мікротома і кваліфікації працівника. Остання має досить велике значення. У найкращому разі товщина парафінового зрізу становить близько 3 мкм, що дозволяє бачити один шар клітин в зрізі. На практиці зазвичай готують зрізи товщиною 5-8 мкм. Зрізи поміщають на предметне скло, ĸᴏᴛᴏᴩᴏᴇ повинна бути покрито адгезивом, зазвичай - яєчним білком. Це потрібно, що б зрізи не відвалюється при фарбуванні.

Парафінові зрізи на склі можуть зберігатися роками, але зазвичай їх фарбують через день-два після виготовлення. Перед фарбуванням проводиться зворотна проводці процедура - депарафінірованіе. Це потрібно для того, щоб клітини знову опинилися водопроникними, а їх структури стали доступними для фарбникі ?? їй. Депарафінірованіе проводять в зворотному порядку: спочатку розчиняють парафін в ксилолі, потім зрізи поміщають послідовно в розчини етилового спирту знижується концентрації до 30%, потім - в дистильовану воду. Зрізи готові до фарбування.

Фарбування виробляють вручну, поміщаючи скло в розчини різних хімікатів, або завдаючи фарбувальні розчини на скло піпеткою. Існують автомати для фарбування зрізів, але їх експлуатація повинна бути дуже дорогою, оскільки потрібно заливати великі обсяги фарбникі ?? їй, які зазвичай дороги. Фарбування парафінових зрізів дозволяє виявити найрізноманітніші компоненти і структури клітини. Існує безліч різноманітних фарбникі ?? їй, що володіють здатністю фарбувати клітинні і тканинні структури. Значний прорив у фарбуванні гістологічних зрізів був зроблений при впровадженні в практику анілінових фарбникі ?? їй.

Найбільш поширеним методом оглядового фарбування гістологічних препаратів, коли видно нд ?? е типи клітин, є фарбування гематоксиліном і еозином.

Крім парафінової заливки, використовують заливку в целлоидин поліетиленгліколь, при цьому застосовується інша схема проводки. У желатин заливають шматочки без зневоднення, відразу після фіксації.

Методи гистохимии спрямовані на виявлення тих чи інших молекул в клітинах і тканинах, що дозволяє вивчати спеціалізовані типи клітин, їх зміни в нормі та патології. Існує безліч гістохімічних методів, багато - дуже складні, багатоступінчасті і трудомісткі.

1. Метиловий спирт.

2. 3N розчин HCl.

3. Реактив Шиффа.