Приготування мазків і відбитків - агроархів сільськогосподарські матеріали

На чисте знежирене предметне скло наносять краплю стерильної води, яка повинна рівномірно розтікатися, що не розбився на крапельки. Не слід при цьому наносити на скло дуже великі краплі води. У краплю вносять трохи досліджуваного матеріалу і ретельно його перемішують, рівномірно розподіляючи тонким шаром. При виготовленні мазків з рідких поживних середовищ взятий петлею матеріал не розбавляється водою. Мазки з середовищ, що містять цукор, готуються з додаванням до краплі досліджуваної рідини невеликий крапельки стерильного обрата або яєчного білка.
Приготовлені мазки висушують зазвичай при кімнатній температурі. Для прискорення висихання препарати можна підігріти, тримаючи за допомогою пінцета Корне предметне скло з мазками, що знаходяться на їх верхній стороні, в теплому повітрі високо над полум'ям пальника (рис. 41).

Обережне висушування перешкоджає швидкому і грубому осадження білків протоплазми бактерій і зберігає цим самим їх структуру. Правильно висушені препарати добре фіксуються. Фіксація забезпечує краще прилипання мазка до скла і робить його більш сприйнятливим до фарбування. Найпоширенішим і придатним майже у всіх випадках є спосіб фіксації мазків жаром. Для цього скло з препаратом мазком догори проводять тричі через полум'я спиртової або газового пальника. Температура нагрітого скла повинна бути такою, щоб при зіткненні його з шкірою тильної сторони руки відчувався б легкий опік. Не слід перегрівати скло, так як це псує мазок і сильно змінює структуру бактерій. Фіксація жаром застосовується при вивченні ставлення бактерій до фарбування за Грамом, виявлення кислотоустойчивости і змісту липоидов. Для дослідження внутрішньої структури бактерій цей метод абсолютно непридатний. У таких випадках для фіксації використовують різні хімічні речовини. Найбільш уживаними є такі прийоми фіксації:
- 95% -ним етиловим спиртом протягом 10-20 хв, якщо спирт слабший, то час фіксації подовжується; сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру (рідина Никифорова); на препарат наносять кілька крапель суміші і дають їм випаруватися;
- сумішшю етилового спирту і формаліну (формаліну 5 мл, спирту 95 мл) - 5-10 хв;
- безводних метиловим спиртом протягом 2-3 хв; спирт зливають, а препарат висушують;
- парами формаліну або оцтової кислоти - 5-10 хв; парами 1-2% -ного розчину осмієвою кислоти; препарат поміщають на підставку в закриту склянку з осмієвою кислотою і витримують 3-5 хв;
- рідиною Карнуа (96 ° -ного етилового спирту - 60 мл, хлороформу - 30 мл, крижаної оцтової кислоти - 10 мл) - 15 хв;
- ацетоном протягом 5 хв;
- 10% -ним розчином азотнокислого срібла - 10 хв;
- 1% -ним розчином сулеми протягом 10-15 хв, після чого препарат промивають розчином кухонної солі і водою;
- рідиною Буена такого складу: насиченого водного розчину пікринової кислоти - 75 мл, формаліну нерозбавленого - 25 мл і крижаної оцтової кислоти - 5 мл.
приготування відбитків
У зв'язку з зростанням інтересу в останні роки до вивчення тонкої будови бактерій були розроблені різноманітні й ефективні способи фіксації бактерій, нанесені на скло у вигляді відбитків. В такому препараті-відбитку зберігається більш-менш точно взаємне розташування клітин в бактеріальному газоні. Метод відбитків полягає в тому, що з агару в чашці Петрі з засіяними на ньому бактеріями вирізують блок і переносять на предметне скло. Потім беруть знежирене предметне скло і прикладають його до поверхні блоку, засіяного бактеріями, отримуючи таким чином перший відбиток. Відбитки роблять до тих пір, поки не скінчиться шар бактерій на блоці, розташовуючи їх зліва направо, починаючи від лівої короткої межі скла. Потім дають відбитками підсохнути і поміщають скло в рідину Карнуа для фіксації. Хороші результати дає також фіксація осмієвою кислоти. У літературі описані та інші методи фіксації відбитків.