Побудова градуировочной (калібрувальної) кривої

За градуювальної кривої визначають концентрацію речовини в досліджуваному розчині. Для цього готують розчин визначається речовини за тією ж методикою, за якою готувалися стандартні розчини для побудови калібрувальної кривої. Необхідно точно дотримуватися кількість і порядок додавання реактивів. Розчин готується в мірній колбі того ж обсягу. Вимірювання на приладі проводяться через такий же проміжок часу після приготування забарвленого розчину, як вимірювання при побудові калібрувальної кривої. У деяких випадках (наприклад, при визначенні аміаку за допомогою реактиву Несслера) необхідно точно по годинах відраховувати час, що минув після приготування забарвленого розчину. Розчин наливають у ту ж кювету, для якої побудована калібрувальна крива, і включивши той же світлофільтр, визначають оптичну щільність розчину. Потім по ній знаходять концентрацію визначається речовини, що відповідає даній оптичної щільності. Градуювальну криву часто перевіряють.

При проведенні кольорових реакцій і побудові калібрувальних кривих необхідно пам'ятати наступне:

1. Вимірювання поглинання слід проводити в додатковій для кольорової реакції області спектра. Так, якщо при реакції розчин забарвлюється в жовтий колір, потрібно вимірювати поглинання цим розчином синього світла, тобто вибрати необхідну довжину хвилі або відповідний світлофільтр.

2. Дослідити кольорову реакцію найкраще в максимумі поглинання - цим досягається найбільша чутливість. Якщо положення максимуму невідомо, його слід визначити. Такі заходи гарантують отримання хороших результатів навіть на малочутлива приладі.

3. У кюветі з контрольним розчином обов'язково повинні міститися всі компоненти, крім досліджуваного речовини.

4. Контрольний розчин повинен бути приготований дуже ретельно, оскільки від цього залежить отримання правильних результатів.

5. Якщо залежність лінійна, для отримання хорошої градуировочной кривої потрібно не менше п'яти точок. Для нелінійної кривої їх потрібно значно більше. Побудова кривої дозволяє виключити точки, поглинання для яких отримано помилково.

6. Вимірювання концентрації необхідно проводити мінімум тричі і на криву наносити все значення, а не їх середню величину. Такий спосіб побудови наочно показує точність визначення концентрації за отриманою градуировочной кривої. Крім того, + він дозволяє відразу виявити неправильні вимірювання по їх сильному відхиленню від кривої. На малюнку показані етапи побудови калібрувальної кривої.

7. Калібрувальні криві, отримані з реагентами різних партій, як правило, не збігаються. Тому при зміні реагенту градуювальну криву треба отримати заново.

8. Найкраща крива, проведена за всіма експериментальних точок, не обов'язково повинна проходити через нуль. Це пов'язано з тим, що для поглинає контрольного розчину практично неможливо отримати точно таке ж співвідношення всіх компонентів, як для зразка.