Підрахунок кількості тромбоцитів в лічильної камері Горяєва

дослідження крові

Уніфікована методика підрахунку кількості тромбоцитів в лічильної камері Горяєва

Принцип. Підрахунок числа тромбоцитів в розлученою крові в лічильної камері із застосуванням фазово-контрастного пристрою і розрахунок їх кількості в 1 мкл або 1 л крові.

Реактиви. 1) реактив 1: кокаїну гідрохлорид - 3 г; натрію хлорид - 0,25 г; фурацилін - 0,25 г; дистильована вода-100 мл; 2) реактив 2: 1% розчин оксалату амонію. Розчин кип'ятять і фільтрують, зберігають в холодильнику.

Найбільш швидкий і повний лізис еритроцитів викликає 1% розчин оксалату амонію.

Хід визначення. Для підрахунку тромбоцитів краще використовувати венозну кров. Як антикоагулянту рекомендується застосовувати ЕДТА (етилендіамінтетраацетат натрію). При взятті капілярної крові з пальця висока ймовірність агрегації тромбоцитів. Перед дослідженням необхідно переконатися у відсутності згустків крові.

Досліджувану кров розводять в 200 разів, для цього в суху пробірку набирають 4 мл реактиву 1 або 2 і 0,02 мл крові. Перемішують і залишають на 25-30 хв для гемолізу еритроцитів. Готують камеру Горяєва і заповнюють її попередньо перемішаної розведеною кров'ю (див. «Підрахунок еритроцитів. Лейкоцитів»). Рахункову камеру поміщають у вологе середовище (чашка Петрі з покладеної по краях змоченою водою фільтрувальної папером) на 5 хв для осідання тромбоцитів. Використовуючи об'єктив 40 × з фазово-контрастним пристроєм, проводять підрахунок тромбоцитів в 25 великих квадратах рахункової камери.

Тромбоцити виглядають в лічильної камері як дрібні, добре заломлюють світло освіти.

Розрахунок числа тромбоцитів в 1 мкл крові проводять за формулою:

де X - число тромбоцитів в 1 мкл крові; а - число тромбоцитів, полічених в 25 великих квадратах рахункової камери; 200 - розведення крові; 25 - число великих квадратів; 250 -1 (1/250) - обсяг одного великого квадрата, так як сторона квадрата дорівнює 5 -1 мм, а висота - 10 -1 мм.

Примітка. Вся використовувана скляний посуд і камера Горяєва повинні бути ретельно вимиті, інакше грязьові і пилові частинки, схожі за розміром із тромбоцитами, можуть бути помилково враховані при підрахунку.