Методи виділення чистих культур аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів

I. Методи механічного роз'єднання бактерій.

1. Посів матеріалу на чашки Петрі бактеріальної петлею, шпателем, піпеткою, послідовно на кілька середовищ, які не прожарюючи інструмент (по Дрігальского). При такому посіві матеріал, що знаходиться на петлі, витрачається поступово, і по лініях сітки, нанесеним в кінці посіву, виростають ізольовані колонії бактерій.

2. Посів пластинчастими розведеннями (метод розсівання в глибині середовища по Коху) застосовують, якщо в досліджуваному матеріалі міститься багато бактерій. Готують десятикратні розведення матеріалу в пробірках, потім виливають вміст пробірок в стерильні чашки Петрі, заливають 20 мл розплавленого і охолодженого до 45 0 С МПА, перемішують, дають агару застигнути і інкубують чашки в термостаті.

3. Роз'єднання на основі рухливості бактерій. Матеріал засівають в краплю конденсаційної рідини скошеного МПА. При цьому рухливі Бактрии як би «мігрують» вгору по агарові скосу і виростають у вигляді колоній, розташованих у верхній частині скошеного агару. При 2-3-кратному пасирування цих колоній в конденсаційну рідина скошеного агару вдається отримати чисту культуру рухомий бактерії (наприклад, протея).

4. Роз'єднання на основі розмірів мікроорганізмів використовують для отримання чистих культур вірусів і мікоплазм. Для цього суміш мікроорганізмів фільтрують через мікро- і мілліпорістие фільтри. Чисті культури мікроорганізмів отримують в фільтрах.

II. Метод зараження чутливих лабораторних тварин (біологічний) заснований на виборчій чутливості тварин до мікроорганізмів різних видів. Це виражається в швидкій швидкості розмноження певного виду мікроорганізмів при попаданні в кров і внутрішні органи тварини, звідки їх потім виділяють. При цьому інші види мікробів гинуть під дією захисних факторів організму тварини. Так виділяють, наприклад, чисту культуру пневмококів з організму білої миші, чисту культуру палички туляремії з організму морської свинки.

III. Методи, засновані на виборчій чутливості мікроорганізмів до впливу зовнішніх факторів (попередньо або під час культивування):

а) фізичних факторів:

- високої температури: спороутворюючі бактерії пологів Clostridium і Bacillus виживають при нагріванні суміші мікробів, а неспорообразующие - гинуть;

- низької температури: при знижених температурах культивують Y.enterocolitica, Y.pestis, L.monocytogenes;

б) хімічних чинників:

- кислот: при обробці кислотою сумішей кислотостійких і некіслотоустойчівих бактерій, останні гинуть, а кислотостійкі (збудники туберкульозу) залишаються в чистій культурі; використання середовища Сабуро (рН 5-6) для виділення грибів;

- лугів: використання лужної пептонною води для виділення V.cholerae; використання методу гомогенізації мокротиння з 10% NaOH при виділенні M.tuberculosis;

- солей: на елективних середовищах ростуть певні види бактерій (наприклад, стафілокок росте на ЖСА, що містить 10-15% NaCl);

- антибіотиків: заснований на виборчій чутливості певних видів бактерій до окремих антибіотиків. При посіві суміші бактерій на середу з додаванням антибіотика, виростають нечутливі до нього бактерії: виділення мікоплазм на середовищах з пеніциліном, виділення анаеробів на середовищах з аміноглікозидами.

- барвників: барвники додають до живильних середовищ для пригнічення росту супутньої флори: при виділенні ентеробактерій в середу Левіна додають метиленовий синій і еозин для придушення грампозитивних бактерій, при виділенні мікобактерій в середу Левенштейна-Йенсена додають малахітовий зелений.

- специфічних інгібіторів: середа з телуриту калію використовується для виділення C.diphtheriae, середа з селеніту натрію використовується для виділення Salmonella, середовища з жовчю використовуються для виділення ентеробактерій і бактероїдів.