Лабораторні методи діагностики крові та сечі дослідження крові

2. Піпетка від гемометра Салі.

4. Дистильована вода.

6. Скляна паличка.

7. Голка Франка або скарифікатор.

Для кількісного визначення гемоглобіну користуються зазвичай колориметричним способом. Принцип визначення полягає в перетворенні гемоглобіну крові в солянокислий гематин і порівнянні кольору отриманого з наявним в приладі стандартом. Приладом для визначення служить гемометр Салі. Він складається з двох запаяних

пробірок зі стандартною кольоровий рідиною 1% розчин солянокислого гематина в гліцерині), що містить 16,67 г% гемоглобіну (16,67 г на 100 мл крові). Між ними розташована градуйована пробірка, що має дві шкали. Одна - з поділками від 0 до 23 служить для визначення гемоглобіну в грамах на 100 мл крові, т. Е. В грам відсотках; інша шкала з поділами від 0 до 140 показує одиниці гемоглобіну (відсоток гемоглобіну).

Оцінка отриманих даних:

Визначення кількості еритроцитів і лейкоцитів

Устаткування і реактиви:

1. змішувачі (меланжери) або пробірки для підрахунку еритроцитів і лейкоцитів.

2. 3% - розчин NaCl (для розведення еритроцитів) або рідина Гайема.

3. 3% розчин оцтової кислоти.

Змішувачі являють собою капілярну піпетку з розширенням ампулою, містить намистинку, що сприяє змішання крові з розводящий рідиною. Змішувачі, призначені для підрахунку еритроцитів, мають капілярів тоншого калібру і більш об'ємистої ампулою на них нанесені мітки одна - 0,5 інша - перед входом в ампулу - 1.0, третій - біля виходу з ампули - 101.

При набору крові до позначки 0,5 вона виявиться розведеною в 200 разів, при досягненні до 1,0 - в 100 разів. Для розведення еритроцитів застосовують 3% розчин кухонної солі або рідина Гайема, в якій краще зберігається форма еритроцитів. Змішувач для лейкоцитів має більш широкий просвіт капіляра і меншу за величиною ампулу. Нанесені три мітки: 0,5. 1,0 і 11. Це дозволяє розвести кров у 10, або в 20 разів (найчастіше розводять у 20 раз). Для розведення лейкоцитів використовують 3 - 50% розчин оцтової кислоти. Оцтова кислота розчиняє еритроцити, що дозволяє вести підрахунок тільки лейкоцитів.

Для підрахунку формених елементів найбільш часто застосовується камера типу Бюркера з вигравіруваним на ній сіткою Горяєва. Рахункова камера складається з товстого предметного скла з особливим поглибленням. На дні поглиблення лічильної камери вигравіруваний сітка, в клітинах якої і підраховуються формені елементи. По краях поглиблення є підвищення, куди накладається покривне скло. Між нижньою поверхнею цього скла і дном поглиблення утворюється замкнутий простір, який і являє собою лічильну камеру. Глибина камери відповідає 0,1 мм. Рахункова камера типу Бюркера розділена навпіл глибокою канавкою і має на кожній половині сітку Горяєва, що дозволяє відразу вважати 2 краплі, не заповнюючи знову камери. Сітка Горяєва має 225 великих квадратів (15х15), 25 з яких поділені на малі, по 16 у кожному; є також порожні квадрати, зібрані в групи по 4 квадрата. Всього в сітці 100 великих порожніх квадратів, зібраних в 25 груп (5X5). Кожна сторона маленького квадратика дорівнює 1/20 мм, а так як висота камери становить 0,10 мм, то обсяг дорівнює 1/4000 ММЗ.

Для підрахунку еритроцитів беруть змішувач для еритроцитів, надягають гумову трубочку, легким насасиваніем набирають кров з уколу до позначки 0,5. Надлишок крові видаляють фільтрувальної папером, після чого кінчик змішувача занурюють в приготований заздалегідь флакон з 3% розчином кухонної солі або розчином Гайема і насмоктують розчин, заповнюючи всю ампулу до позначки 101. Негайно знімають гумову трубку, затискають змішувач по довжині між великим і вказівним або середнім пальцем і струшують протягом 3 хвилин. Після цього заповнюють лічильну камеру, зливають

1-2 краплі і випускають наступну краплю на сітку.

Для підрахунку лейкоцитів кров з місця уколу набирають до позначки 0,5, потім розводять 3% розчином оцтової кислоти до позначки 11. Енергійно струшують протягом 3 хвилин, після чого зливають

1-2 краплі і заповнюють лічильну камеру. При роботі з пробірками

для підрахунку еритроцитів, наливають 4 мл 3% розчину кухонної солі або рідини Гайема і в неї випускають 0,02 мл. крові,

отмеренной піпеткою від гемометра Салі. Для підрахунку білих кров'яних елементів в пробірку наливають 0,4 мл 3 - 5% розчину

оцтової кислоти і 0,02 мл крові. Енергійно струшують пробірки, потім в рідину опускають піпетку з гемометра Салі і,

набравши вміст, заповнюють лічильну камеру.

Заповнення лічильних камер:

Добре вимите і витерті шліфоване покривне скло накладають на виступаючі бічні краю. М'якоттю великих пальців покривне скло притирають, рухаючи вгору і вниз, весь час щільно притискаючи, поки не з'являться, так звані, Ньютонови кільця. Перед заповненням камери знову енергійно струшують змішувачі. випускають 2 краплі на фільтрувальний папір, а третій заповнюють щілину між камерою і покривним склом. Рідина по капілярності засмоктується між ними і заповнює простір над сіткою. Рідина при заповненні камери не повинна затікати в жолобки, якщо це стукає, то її видаляють фільтрувальної папером.

Підрахунок еритроцитів. Підрахунок проводять через 1-2 хвилини (коли еритроцити осядуть на дно камери), користуючись об'єктивом 40Х і окуляром 7X, або об'єктивом 8Х і окуляром 15Х.

Щоб не збитися з рахунку, дотримуються певної

послідовності рахунку: пересуваючи з квадрата в квадрат по

горизонталі один ряд зліва направо, наступний - справа наліво. Вважають, крім що знаходяться всередині квадрата, всі еритроцити, що лежать на двох лініях, наприклад, на лівій і верхній, і пропускають все що лежать праворуч і знизу. Вважати еритроцити треба в 5 великих квадратах, т. Е. В 80 маленьких.

Щоб уникнути неточності, внаслідок не цілком рівномірного розподілу крові в камері, вибирають для підрахунку не 5 сусідніх квадратів, а просуваються по всій сітці.

Кількість еритроцитів в 1 ММЗ (шукане) обчислюють таким чином: одиницею рахунку завжди, при кожній підрахунку, в будь-сітці служить малий квадрат. Обсяг його, як було зазначено, дорівнює 1/4000 мм 3. Порахувавши еритроцити в 5 великих квадратах (80 малих квадратів), ділять цю кількість на 80 і множать на 200 (ступінь розведення крові) та на 4000 (щоб отримати кількість

клітин у всьому кубічному міліметрі); практично, отже, отримане число множать на 10000 (додають чотири нулі).

Приклад. У 80 маленьких квадратах підраховано 480 еритроцитів. Отже, кількість еритроцитів в 1 ММЗ крові одно: