Лабораторна діагностика мікозів

Мате-ріалом для дослідження є уражені волосся, лусочки шкіри, шматочки ніг-тей, шкірні та нігтьові зіскрібки, гній, мокротиння, пунктати лімфатичних вузлів, кісткового мозку, внутрішніх органів, кров, спинномозкова рідина, шлунковий сік, жовч, іспражніться-ня, біоптати і ін. Матеріал беруть стерильними інструментами (пінцетом, скальпі-лем, голкою, ножицями, ло-Жечка Фолькмана і т.д.); тампони для взяття ма-териала не використовуються. Пато-логічний матеріал обробляють сумішшю їдкого калію з діметісульфоксідом (20 г КОН + 100 мл 60% -го ДМСО). Препарати «роздавленої краплі» досліджують під великим збільшенням (х40) звичайного або фазово-контрастного мікроскопа.

У хворих микроспорией в променях люмінесцентної лампи уражені волосся мають смарагдово-зелене свічення.

Для діагностики мікозів застосовується широкий комплекс лабораторних досліджень (мікроскопічний, мікологічний, алергічний, серологічний, генетичні методи, биопроба - схема 23).

Схема 23. Лабораторні методи діагностики мікозів

Мате-ріал дляісследованія: уражені волосся, лусочки шкіри, шматочки ніг-тей, шкірні та нігтьові зіскрібки, гній, мокротиння, пунктати лімфатичних вузлів, кісткового мозку, внутрішніх органів, кров, спинномозкова рідина, шлунковий сік, жовч, іспражніться-ня, біоптати та ін.

Експрес-діагностика: РІФ, ПЛР

Мікроскопічний метод: дослідження нативних і забарвлених препаратів з метою виявлення елементів гриба (міцелію, суперечка)

Мікологічний метод: посів на спеціальні живильні середовища (Сабуро та ін.). Ідентифікація виділеної культури гриба на підставі характеристики колоній, мікроскопічної будови гриба, а також за біохімічними та іншими ознаками.

Серологічний метод: визначення антитіл до грибів або їх антигенів в сироватці крові хворих на мікози за допомогою РА, РСК, РНГА, РІФ, ІФА, иммуноблотинга

Алергічний метод: постановка внутрішньошкірних алергічних проб з грибковими алергенами

Біопроба: зараження чутливих жи-Вотня з подальшим виділенням чистої культури гриба

Мікроскопічний метод грає важливу роль в діагностиці мікозів, тому що дає можливість швидко виявити в нативних і забарвлених препаратах наявність і розташування клітин, суперечка гриба і ниток міцелію в патологічному матеріалі. Найбільш часто для забарвлення грибів застосовують загальноприйняті методи Грама, Романовського-Гімза, Циля-Нільсена, Бурри. Розроблено також широкий набір спеціальних методів забарвлення грибів.

Експрес-діагностика мікозів здійснюється за допомогою прямої РИФ.

Мікологічний метод (виділення чистої культури гриба і її ідентифікація) є найважливішою складовою частиною лабораторного дослідження при мікозах. Посіви роблять на спеціальні щільні і рідкі (неселективні і селективні) поживні середовища (середовища Сабуро - мальтоза-пептонна, сусло-агар, Чапека; кукурудзяний, рисовий, картопляний, кровя-ної, шоколадний, серцево-мозкової, вугільно-дріжджовий агар і т . Д.). Селективні середовища містять антибіотики (левоміцетин, стрептоміцин, пеніцилін та ін.), Барвники (бенгальський рожевий і ін.) Або дезинфікуючі речовини. На відміну від слаболужних середовищ для вирощування більшості бактерій, середовища для культивування грибів мають кислу або слабокислу рН (5,7-6,8).

Для первинної диференціації грибів розроблений агар CHROM з хромогенного субстратами, що розщеплюються ферментами грибів з утворенням забарвлених сполук, в результаті чого колонії різних видів грибів забарвлюються в різні кольори - червоний, жовтий, білий, кремовий, ко-річневая, чорний і т.д.

Культивування грибів здійснюють зазвичай при температурі 22-28 0 С протягом 2-4 тижнів. Ідентифікацію виділеної культури гриба проводять на підставі характеристики колоній (зовнішній вигляд, форма, консистенція, колір), мікроскопічної будови гриба (будова міцелію, форма і розташування конидиеносцев і конідій - суперечка), а також за біохімічними та іншими ознаками.

Серологічний метод - визначення антитіл до грибів або їх антигенів в сироватці крові хворих на мікози за допомогою РА, РСК, РНГА, РІФ, ІФА, иммуноблотинга

Алергічний метод - постановка внутрішньошкірних алергічних проб. Проводять з грибковими алергенами, які представляють собою зва-сі з убитих грибів, фільтрати знешкоджених нагріванням культур, полісахаридні і бел-кові фракції клітин гриба. Результати алергічних проб враховують через 20 хв (НЕ-повільні) і через 24-48 год (уповільнені реакції).

Для виявлення грибкової сенсибілізації орга-нізму також застосовують імунологічні тести invitro (дегрануляция базофілів як тест гіперчутливості-сті негайного типу, а для виявлення гіперчувстві-ності уповільненої типу - реакцію гальмування міграції лейкоцитів або бласттрансформации лімфоцитів).

Біопроба - зараження чутливих жи-Вотня (миші, щури, хом'яки, кролики, морські свинки, соба-ки, кішки) різними способами (накожно, під шкіру, підшкірно, внутрішньом'язово, внутрішньочеревно, внутрішньовенно, внутрисердечно, интрацеребрально, перорально, интратрахеально) для виділення чистої культури гриба.

Гістологічний метод спрямований на вияв-ються гриба в тканинах, отриманих при біопсії і аутопсії.

Генодіагностика. Розроблено ПЛР для виявлення в матеріалі від хворого специфічних фрагментів ДНК грибів, що дозволяє ви-явити близько 40 видів грибів, в тому числі Candidaalbicans і її варіанти, Т.rubrum і С.neoformans. різні види Aspergillus. збудників паракокцидіоїдомікоз (Paracoccidioidesbrasiliensis) і гістоплазмозу (Histoplasmacapsulatum).