Клостридії ботулізму і ботулізм
клостридії ботулізму
С. botulinum - збудник ботулізму, вперше описаний Е. Ван Ерменгемом в 1896 р
Морфологія і фізіологія
Бактерії різного розміру з перитрихиально розташованими джгутиками. Утворює спори, які надають бактеріальної клітці вид тенісної ракетки. Вираженою капсули не мають. Розмножуються на глюкозо-кров'яному агарі, утворюючи невеликі прозорі колонії з рівними або порізаними краями, оточені зоною гемолізу. На рідких середовищах спостерігається рівномірне помутніння і осад. Сахаролитические властивості непостійні і не використовуються для ідентифікації цих бактерій. За протеолітичним властивостями не однорідні. Протеолітичні штами гидролизуют казеїн і утворюють H2S.
Вид C.botulinum неоднорідний за антигенною специфічності утворених токсинів. Останні підрозділяються на 7 сероварів: А, В, С і т.д. Вивчення антигенної структури бактеріальних клітин в зв'язку з особливостями патогенезу ботулізму при ідентифікації збудника не проводиться.
Патогенність і патогенез
Патогенність клостридії ботулізму пов'язана з його токсином, що є найсильнішим отрутою, 1 мкг якого може вбити дорослу людину. Екзотоксин є нейротоксином. Як і багато інших екзотоксини складається з двох субодиниць, одна з яких відповідає за адсорбцію на рецепторах чутливих клітин - нейронів, інша - за проникнення в них шляхом ендоцитозу і розвиток подальших подій. Останні полягають у ингибиции Са-залежного звільнення ацетилхоліну, внаслідок чого блокується передача нервового імпульсу через синапси. Це призводить до ураження бульбарних нервових центрів, порушення ходи, зору, асфіксії і іншим явищам. Летальні результати до 60%. Освіта ботулотоксину контролюється про-фагом при лизогенизации даних бактерій і генами C.botulinum. При попаданні клостридії в рану може виникнути ботулізм ран. При цьому вегетативні клітини продукують нейротоксин, викликаючи картину харчової інтоксикації. У дітей 3-8 міс. життя ботулізм виникає в результаті проникнення клостридії при пологах через пупковий канатик. Хвороба протікає мляво внаслідок надходження в організм малої кількості токсину. Є причиною раптової дитячої смертності.
Постінфекційний імунітет відсутній. Це пов'язано зі слабкими імуногенні властивості ботуліністіческого екзотоксіна.Екологія і епідеміологія. Природним місцем існування С. botulinum є кишечник багатьох переважно травоїдних тварин, а також риб, ракоподібних, молюсків, в якому вони розмножуються і виділяються з фекаліями в навколишнє середовище. Спори клостридії ботулізму в значній кількості зустрічаються в грунті, воді, мулі. Вони резистентні до високої температури, і витримують кип'ятіння протягом 1-5 год. Зараження відбувається аліментарним шляхом. Причиною отруєння є вживання рибних, овочевих, м'ясних консервів та інших харчових продуктів, зокрема консервованих в домашніх умовах.
Ботулізм - важке, часто фатальне токсикоінфекція, яка виникає внаслідок вживання продуктів, що містять токсини Clostridium botulinum, супроводжується специфічними ураженнями нервової системи, переважно ядер мовно-гортанних і окуломоторного нервів. Іноді хвороба розвивається після інфікування ран клостридиями ботулізма.С botulinum продукує 8 типів сильних токсинів: А, В, С. С2, D, Е, F, G, що відрізняються антигенної специфічністю, що необхідно враховувати при проведенні лабораторної діагностики та лікуванні. Ботулізм у людей викликають типу А, В, Е і F, типу С і D - у ссавців і птахів. Патогенність типу G для людини і тваринах не доказана.Основним резервуаром і джерелом інфекції в природі теплокровні травоїдні тварини, в кишечнику яких клостридії розмножуються і з фекаліями у великій кількості потрапляють в грунт і воду.Заболеваніе виникає при споживанні в їжу м'ясних, рибних та інших, переважно консервованих продуктів, в яких накопичуються клостридії ботулізму і їх токсини. Небезпечними є консервовані продукті домашнього приготування, особливо гріби.Лабораторная діагностика ботулізму спрямована на виявлення токсину в матеріалах, взятих у хворих, а також харчових продуктах, які спричинили отруєння. Токсин визначають шляхом постановки біопроби і встановлення його типу в реакції нейтралізації. Значно рідше виділяють чисту культуру збудника і проводять серологічні дослідження.
взяття матеріалу
У всіх випадках захворювань з симптомами ботулізму у хворих обов'язково беруть промивні води шлунка, блювотні маси, кров, фекалії, сечу, від трупа - вміст шлунка і кишок, лімфатичні вузли, шматочки печінки, головного і спинного мозку. Необхідно досліджувати і залишки підозрілої піщі.Кровь у хворого в кількості 10 мл беруть до введення ботуліновим лікувальних сироваток в пробірку з лімоннокіслого натрію в співвідношенні 3: 1. Промивні води шлунка, блювотні маси (100-200 мл) і стілець (50-60 г) поміщають в скляні банки з гумовими пробками. Консервуючі речовини додавати не можна. При взятті секційного матеріалу 50-60 г кожного органу поміщають в окрему банку. Залишки їжі відбирають по 200-300 г.Плотние матеріали спочатку розтирають в ступках, вносять подвійний обсяг ізотонічного або желатино-фосфатного розчину і залишають при кімнатній температурі на 2 години для вилучення токсину. Екстракт центрифугують, рідина над осадом використовують для поставки біологічної проби. Кров вводять без будь-якої обработкі.Проби, доставлені в лабораторії, досліджують одночасно в двох напрямках: 1) для виявлення ботулотоксину, 2) з метою виділення С. botulinum. Одночасно в тих же пробах віяляють і С. perfringens.
Виявлення ботуліновим токсинів
Наявність ботулінового токсину в досліджуваному матеріалі і визначення його типу проводять за допомогою реакції нейтралізації на білих мишах. Для цього відбирають 5 пар мишей вагою 16-18 г на кожну пробу. В реакції використовують діагностичні (нелікувальні!) Антитоксичні ботуліном сироватки типів А, В, Е, F, які розводять 0,85% розчином хлориду натрію до 100-200 МО / мл, що забезпечує нейтралізацію гомологічного токсину в досліджуваній пробе.Центріфугат доставлених матеріалів або кров хворого розливають по 1,4 мл в 5 пробірок. У перші чотири з них вносять по 0,6 мл (200 МО / мл) антитоксических протіботуліновіх сироваток відповідно типів А, В, Е і F. У останню пробірку додають 0,6 мл нормальної сироватки. Всі пробірки витримують 40 хв при кімнатній температурі для нейтралізації токсину. По 1-му мл суміші з кожної пробірки вводять п'яти парам мишей (центрифугат + сироватки - підшкірно, кров + сироватки - в черевну порожнину). За тваринами спостерігають протягом 3-4-х днів.При наявності в досліджуваному матеріалі ботулінового токсину гинуть чотири пари мишей, крім двох, яким була введена суміш матеріалу з тим типом сироватки, нейтралізувала дію гомологічного типу токсину При загибелі всіх мишей пробу слід повторити з розведеним в 10, 20, 100 разів біологічним матеріалом.Постановка реакції нейтралізації з визначенням типу ботулотоксину має важливе значення при виборі відповідної сироватки для специфічного лікування ботулізму. Тому при видачі відповіді про виявлення ботулінового токсину лабораторія повинна обов'язково вказувати його тіп.Еслі бактеріологічна лабораторія має типові антитоксичні ботуліном еритроцитарні діагностикуми, серотип токсину краще визначати за допомогою реакції непрямої гемаглютинації. Вона високоспецифічні, чутлива, значно економічніше, швидше дає результат, ніж реакція нейтралізації in vivo. Для виявлення збудника ботулізму або його токсину можна застосовувати метод ІФА і імуноелектрофорезу.Профессор С.М. Минервин і його співробітники в 1959 р розробили прискорений метод діагностики ботулізму за допомогою визначення фагоцитарного показника. Він ґрунтується на тому, що ботулотоксину різко пригнічують фагоцитарну функцію лейкоцитів. Гомологичная антитоксичну ботуліновим сироватка нейтралізує лейкотоксічну дію екзотоксину, чого немає при дії гетерологічних сивороток.Опит ставлять з використанням мікродоз компонентів. У 5 маленьких пробірок вносять піпеткою Панченкова по одному обсягу лімоннокіслого натрію (V4 поділів піпетки до мітки 75) і по два обсягу крові хворого. Потім в пробірку № 1 додають один обсяг 0,85% розчину хлориду натрію, а в пробірки № 2, С, 4 і 5 - відповідні діагностичні ботуліном сироватки типів А, В, Е, F в тому ж обсязі. Після перемішування всіх компонентів пробірки ставлять в термостат на 30 хв для нейтралізації можливого токсину в крові хворого гомологичной сироваткою і в усі пробірки вносять по одному обсягу 1 млрд суспензії культури золотистого стафілокока і знову поміщають в термостат на 20 хв для завершення процесу фагоцитозу. З вмісту кожної пробірки готують мазки, забарвлюють за Романовським-Гімзою і визначають фагоцитарний показник. Для цього підраховують кількість спожитих коків в 50 полінуклерах і ділять отримане число на 50. Якщо в крові хворого є токсин, то фагоцитарні показники у всіх пробах крові будуть низькі, за винятком показника в тій пробірці, де тип токсину і сироватки гомологични. У важких випадках ботулізму фагоцитарний показник може падати до нуля. Гомологичная сироватка, нейтралізуючи токсин, відновлює цей показник до норми. Метод не можна використовувати для виявлення ботулотоксину в харчових продуктах і секційному матеріалі.
Виділення культур С. botulinum
До посіву досліджуваний матеріал емульгують в порцелянову ступку як вище зазначено. По 10 мл матеріалу сіють в 4 флакона з 75-150 мл свіжорегенерованого рідкого середовища (Кітт-Тароцці, Хоттингера, казеїново-грибного). Два флакона прогрівають: один при 60 ° С протягом 15 хв (для селекції С. botulinum типу Е), другий - 20 хв при 80 ° С. Два флакона інкубують при 28 ° С (для типів Е і F) інші - при 35 ° с в анаеростаті або під шаром вазелінового масла товщиною 0,5 см. На 2, 4, 6 і 10-й день з флаконів, де є зростання. виготовляють мазки, забарвлюють по Граму і проводять мікроскопію. Збудник ботулізму має вигляд великих грампозитивних паличок з овальної субтермінально спорою, що нагадують тенісні ракеткі.Чтоби визначити тип ботулотоксину з флакона відбирають 10-15 мл культуральної рідини, центрифугують її і ставлять реакцію нейтралізації на білих мишах або РНГА з типовими ботуліновим сироватками, як вище описано. для отримання ізольованих колоній з метою виділення чистої культури краплю культуральної рідини з флакона вносять на поверхню анаеробного кров'яного або печінкового агару і втирають стек начення шпателем в агар послідовно в трьох чашках. Посіви вирощують в анаеростатах. Через 48 год інкубації вивчають характер колоній. На кров'яному агарі колонії можуть бути неправильної форми з фестончатими краями, або гладкі, круглі, з зонами гемолізу навколо них. Різні типи С. botulinum можуть утворювати неоднакові колонії. При посіві уколом в високий стовпчик цукрового агару колонії мають вигляд чечевічок або жмуточків вати.После микроскопирования типових колоній їх відсівають на середу Кітт-Тароцці, отримують чисту культуру і ідентифікують її за морфологічними, культуральними, токсигенними і біохімічними властивостями шляхом посіву в середовищі Гисса. Палички ботулізму ферментують глюкозу, галактозу, гліцерин, мальтозу, сахарозу, фруктозу до кислоти і газу, розріджують желатин, виділяють H2S, не утворюють індол. Для диференціації З botulinum від інших анаеробів використовують і інші тести.Определеніе сероварів збудника ботулізму здійснюють за допомогою реакції нейтралізації токсину in vivo, методом ІФА або в РНГА.Методіка виділення С. perfingens при харчових отруєннях викладена в розділі анаеробної газової інфекції.
Профілактика і лікування
Вакцинопрофілактика не проводиться. Для лікування використовують протівоботулініческой полівалентної сироватку, оскільки антитіла до одного серовару токсину НЕ нейтралізують інші серовар. Цю сироватку вводять і з метою пізньої профілактики особам, підозрюваним у вживанні заражених продуктів.
Інфекціоністи в Москві
Ціна: 1700 руб.
Спеціалізації: Гастроентерологія, Терапія, Гепатологія, Інфекційні хвороби.
Рязанцева Марина Олександрівна
Ціна прийому: 1700 руб.
Записатися на прийом 1700 руб.
