Кафедра мікробіології

Лабораторна діагностика збудника ерліхіоза собак ... .. ................ 15

Ерліхіоз собак - це трансмісивна гарячкова хвороба, збудник якої належить до великої групи мікроорганізмів - рикетсій. Рикетсії названі в честь американського мікробіолога Х.Т. Рикетса, який відкрив збудників плямистої лихоманки Скелястих гір і загиблого від висипного тифу. Відомо 12 видів рикетсій, що відносяться до трьох родів: Cowdria, Neorickettsia і Ehrlichia.

Рід Ehrlichia включає дрібних облігатних внутрішньоклітинних бактерій, що розмножуються в паразітіформних вакуолях гранулоцитів, моноцитів і рідше інших клітин. Вони передаються горизонтальним шляхом через вектор (кліщів, рідше трематод). Зараження Ерліх відбувається при їх попаданні в кров чутливого організму.

Бактеріальні клітини Ерліха обмежені двошарової мембраною, причому зовнішня мембрана у різних видів різниться своєю товщиною і складчатостью. В оболонці Ерліха недостатньо пептидогликана, тому вона нетривка.

Ерліх собак першими стали відомі людству з числа бактерій роду Ehrlichia: в 1935 році Донаті і Лестоквард описали E. canis, а через 5 років Гордон - Anaplasma phagocytophila. Процес виявлення нових видів бактерій роду Ehrlichia триває і в даний час. Він утруднений тим, що Ерліх не здатні рости на штучних поживних середовищах, в курячих ембріонах і деякі види навіть в культурі клітин. Лише з впровадженням в ветеринарну практику ПЛР та інших молекулярних методів діагностики з'явилася реальна можливість ідентифікації і диференціації різних видів, що утворюють даний рід.

Ерліха і анаплазм класифікують за типом інвазіруемих ними клітин крові - гранулоцитів, лімфоцитів, моноцитів і тромбоцитів. Відповідно до цього називають викликані ними хвороби «гранулоцитарним ерліхіохом», «моноцитарний ерліхіозом», «циклічної тромбоцитопенией» і т.д. Але треба зазначити, що деякі Ерліх крім основного клітинного типу можуть инвазировать ще й інші клітини.

Загальна характеристика риккетсий і місце, займане Ehrlichia canis серед риккетсий.

Рикетсій відносять до бактерій, з якими вони складають схожість за структурою, складом, характером обміну і способу розмноження. Однак рикетсії займають серед бактерій відокремлене положення, яке визначається рядом ознак:

- рикетсії є облігатними внутрішньоклітинними паразитами, на відміну від бактерій вони не здатні до зростання на звичайних, неклітинних поживних середовищах;

їх біологія пов'язана з паразитизмом у членистоногих;

викликані рикетсіями захворювання характеризуються особливостями клініки та епідеміології.

Здродовский і Голіневич в 1942-1944 роках вивчали мікроструктуру риккетсий на рикетсії Провачека за допомогою фарбування мазків крові за Романовським. Це спосіб забарвлення дозволив виявити 4 морфологічних типу рикетсій і наявність в них диференційно забарвлених хроматінових зерен.

1. коккоподібних рикетсії (тип а) мають вигляд дуже дрібних овоїдів або еліпсоїдів, діаметром близько 0,5 мкм, часто утворюють діплоформи у вигляді гантелей, зрідка ланцюжка і округлі конгломерати. Можуть бути однозерністимі або гомогенними. Характерні для риккетсиозов в стадії максимальної інфекції.

2. Паличкоподібні (короткі паличкоподібні, тип b) рикетсії, у вигляді ніжних коротких паличок діаметром близько 1-1,5 мкм, двузерністие освіти з полюсний розташованими зернами, пов'язаними бліднокрашених протоплазми. Характерні для риккетсиозов в стадії, що передує максимальній інфекції.

3. Бацилярні (довгі паличкоподібні, тип с) рикетсії, у вигляді подовжених і зазвичай вигнутих паличок розміром до 3-4 мкм, двузерністие або 3-4-зернисті освіти з полюсний розташованими зернами. Характерні для початкового періоду риккетсиозов.

4. Ниткоподібні (міцелярні, тип d) рикетсії, у вигляді довгих, нерідко гігантських, химерно вигнутих ниток, нагадують великі спірили розміром до 40 мкм і більше, многозерністие, з рівномірним розподілом зерен. Характерні для ранніх фаз риккетсиозов, частіше зустрічаються в легенях.

Дослідники роблять висновок, що однозерністие овоида типу а є найпростішою формою риккетсий, які здатні до відтворення собі подібних овоїдів. У ряді випадків розмножуються овоида не розділяються, а дочірні особини залишаються безперервно пов'язаними протоплазми, в результаті виникає форми b і с. Ці форми також здатні до самостійного розмноження з відтворенням собі подібних біполярних форм. Форма d утворюється в результаті нерозділена при розмноженні форм b і с. таким чином, весь плеоморфізм риккетсий морфологічно можна визначити як результат зростання з поділом або без поділу їх на утворюються дочірні особини при здатності цього паразита до відтворення багатоклітинних міцелярних утворень. 1

Класифікація. Згідно определителю Берджи, Ehrlichia canis, збудник ерліхіоза собак, класифікується наступним чином:

секція 9 - рикетсії і хламідії

Морфологія і цикл розвитку. E. canis - дрібна (1-3 мкм), грам, коккоподібних бактерія, яка паразитує в циркулюючих макрофагах і моноцитах собак. Вектором є кліщі, у яких E. canis паразитує в гемоцитів, клітинах середнього відділу кишечника і в слинних залозах. У цих клітинах все стадії розвитку бактерії проходять в обмеженою мембраною паразітоформной вакуолі. Морфогенез збудника складається з перетворення елементарного тільця овальної або кокковидной форми (0,4 мкм) в ініціальні тільце невизначеної форми розміром 1-2 мкм з подальшою трансформацією в Морула - колонію мікроорганізмів, яку називають також тільцем-включенням (2-4 мкм). Цикл завершується розпадом морули на елементарні тільця.

Зовні бактерія покрита зовнішньої і внутрішньої мембранами, причому зовнішня мембрана у Ерліха, на відміну від інших представників сімейства рикетсій, не має потовщених ділянок. У клітинній оболонці Ерліха не виявлено велику кількість пептідогліканов.

Нерухомі, спор і капсул не утворюють, ядерна речовина розташовано дифузно у вигляді гранул, в цитоплазмі знаходиться нуклеоїд, який має гранулярную структуру, виявлені

Тинкторіальні властивості. Здатність фарбуватися аніліновими барвниками у E. canis та ж, що і у інших представників порядку Rickettsiales. За Грамом забарвлюються в червоний колір. Як кокковидной рикетсії, E. canis за Романовським-Гімзою забарвлюється в різні відтінки блакитного кольору, причому всередині диференціюються хроматіновие включення зі звичайним для хроматину червонуватим відтінком. За Здродовського рикетсії в мазках крові фарбуються в рубіново-червоний колір, а клітинні елементи клітини-господаря - в блакитний (протоплазма) або синій (ядра) кольору. 4

Культуральні властивості. Збудник E. canis не росте на штучних поживних середовищах, але розмножується в культурах клітин. Для його репродукції використовують первинні культури моноцитів і макрофагів собаки, епітелію людини і ряд інших культур клітин. Збудник може бути також ізольований культивуванням лейкоцитів, взятих від підозрюваних у зараженні тварин.

Підтримуюча середовище для заражених збудником культур клітин повинна містити не менше 10% сироватки крові плоду корови і глютамин. Оптимальна температура інкубації інфікованих E. canis культур становить 34-37 0 С.

Також для культивування моноцитів собак використовують середу Голка з додаванням 20% сироватки крові собаки при температурі 37 0 С. 5

Біохімічні властивості. Як і інші Ерліх, E. canis є облігатним аеробом, нездатним ферментувати вуглеводи і нужденним в зовнішньому джерелі АТФ. Максимальну метаболічну активність він проявляє в кислому середовищі.

Бактерія проявляє високу чутливість до доксицикліну, окситетрацикліну, Міноциклін, хлорамфеніколу, байтрілу і, в меншій мірі, до аміноглікозидів. Налідіксова кислота і еритроміцин не роблять вираженого бактерицидної або інгібуючої дії на E. canis.

Геном E. canis мало вивчений, його розмір дорівнює приблизно 1 млн. Пар основ. У ньому встановлено наявність 5 генів, що кодують синтез зовнішнього мембранного протеїну.

Джерелами інфекції в дикій природі служать вовки, шакали, лисиці. Серед сприйнятливих тварин E. canis циркулює за допомогою вектора, в якості яких служать іксодові кліщі. Вектор заражається при ссанні крові інфікованих тварин, гемоцитів збудник переноситься в слинні залози, де активно розмножується. В подальшому під час нападу на здорову собаку кліщ заражає її через що містить E. canis слину. Збудник зберігає свою життєздатність в організмі кліща протягом 5 місяців, що дозволяє зараженим восени кліщів зимувати і передавати інфекцію собакам вже ранньою весною. Не виключена можливість зараження при переливанні крові від хворої тварини здоровій, тому в ендемічних по ерліхіозом районах існує необхідність ретельного обстеження на цю інфекцію всіх тварин-донорів з урахуванням того, що можливо її хронічне протікання.

Збудник здатний викликати інфекцію у собак різних порід, віку і статі. Передбачається наявність генетичної схильності до сприйнятливості у собак деяких порід: доберман, грейхаунд, німецька вівчарка, гончак - у них захворювання протікає значно важче і частіше завершується летальним результатом.

На тяжкість перебігу хвороби можуть впливати патогенність штаму збудника, його заражає доза, імунний стан організму тварини і наявність конкурентних переносяться кліщами, а також вторинних інфекційних та інвазійних хвороб.

В організмі збудник, крім клітин крові, виявляється в кістковому мозку і в селезінці, а також в інших паренхіматозних органах - всюди, куди відбуваються крововиливи.

Імунітет нестерильний, збудника виявляють в крові більше року. Антитіла IgM і IgA до E. canis у собак виявляють на 7-й день, на 21-й день з'являються імуноглобуліни класу IgG. 11

Основною мішенню для специфічних антитіл служать антигени E. canis з ММАС 21-160 кБ, причому найбільш високий титр антитіл до протеїнів агента з ММАС 27-30 кД. Мажорний поверхневий протеїн E. canis з ММАС 30 кД викликає інтенсивний гуморальну імунну відповідь у собак і дає перехресні реакції з зовнішніми мембранними протеїнами Ерліха інших видів.

Штами збудника виявляють антигенну гетерогенність, імунітет штаммоспеціфічен: резистентність до повторного зараження гомологічним штамом збудника вище, ніж резистентність до гетерологічние штаму.

Матеріал для дослідження. Для прижиттєвої діагностики в лабораторію направляють кров з вени і кліщів, зібраних з тварин. У ряді випадків виникають порушення функції відтворення, в тому числі аборт, народження нежиттєздатних щенят, тривала тічка з виділенням крові. У таких випадках в лабораторію відправляють абортований плід або виділення з піхви.

У загиблих тварин відзначають геморагії в підшкірній клітковині і більшості внутрішніх органів, з яких найбільше уражаються кістковий мозок (зазвичай при хронічному перебігу захворювання), селезінка, легені, центральна нервова система (крововиливи в головний мозок), серце, шлунок, кишечник і урогенітальні шляху. Патологічний матеріал для лабораторної діагностики відбирають саме з цих органів.

Біопрепарати. Специфічного лікування і заходів профілактики не розроблено.