Диференційно-діагностичні (кольорові) поживні середовища
Середовище Ендо. До 100 мл нейтрального розплавлений-ного 3% -ного мясопептонного агару додають 1 мл 10% -ного водного розчину кристалічного вуглекисло-го натрію, витримують в текучепаровом апараті в ті-чення 10 хв при температурі 100 ° С, охолоджують до 60 ° і стерильно додають 1 г хімічно чистої лактози, розчиненої в 5 мл стерильної води, і суміш фуксину з безводним сульфитом натрію. Суміш готують слідую щим чином. Розчиняють 0,5 г сульфіту натрію в 5 мл стерильної води і додають до 1 мл насиченого спір-тового розчину основного кристалічного фуксину до тих пір, поки рідина не стане безбарвною або злегка рожевою. Знебарвлену суміш фуксину з сульфитом додають до розплавленого агару, і останній прини-томить рожевий колір. Після ретельного перемішування (стежать за тим, щоб не утворювалася піна) середу розливають по чашках. При охолодженні середовище робить кольоровий, в товстих шарах має рожевий відтінок. На цьому середовищі можна легко відрізнити кишкову паличку, паратіфозних бактерій.
Готують середу перед посівом. Щоб уникнути почервоніння її захищають від світла. Випускається у вигляді сухого порошку. Спосіб приготування вказується на етикетці.
Середовищах Гіса. Для виготовлення індікатораАндреде беруть 100 мл дистильованої води, 0,5 г фуксину кислого і 16 мл 4% -ного водного розчину їдкого натру. Витримай-ють на водяній бані 10 хв. Зберігають в темному місці.
Середу з індикатором Андреде готують слідую щим чином. Готують пептонную воду. Для цього беруть 1% пептона і 0,5% кухонної солі на певний обсяг дистильованої води. Кип'ятять до розчинення пептона, фільтрують через паперовий складчастий фільтр, встановлюють рН 7,0-7,2. Після подщелачивания 10% -ним розчином NаОН знову кип'ятять протягом 10 хв, фільтрують і до готової 1% -ної пептонній воді (рН 7,0-7,2) додають 1% індикатора Андреде. До середи з індикатором додають необхідні вуглеводи або багатоатомні спирти в кількості 0,5% - 1% (лак-тозу, глюкозу, сахарозу, маніт, дульцит і ін.). Середовища розливають по пробірках, забезпеченим для обліку обра-тання газу бродильними трубочками. Замість трубо-чек іноді поміщають шматочки вати - 0,02 г на пробірками-ку. Проводять дробову стерилізацію при температурі 100 ° С протягом 20 хв три дні поспіль.
Правильно приготовлена середовище має солом'яно-жовтий колір.
Середовище Кесслера. В 1 л водопровідної води вносять 50 мл свіжої бичачої жовчі і 10 г пептона. Кип'ятять на водяній бані 15 хв, постійно збовтуючи. Після повного розчинення середу фільтрують через вату і додають 10 г лактози. Доводять рН до 7,7. До 1 л середовища додають 4 мл 1% -ного водного розчину генціанвіолета і розливають в пробірки з поплавками. Стер-товують в автоклаві при надмірному тиску 0,1 МПа протягом 15 хв.
Визначення рН поживних середовищ
Для культивування мікробів на штучних поживних середовищах особливе значення має концентрація водневих іонів, так як кожен вид мікроба може розвиватися тільки при певній кислотності або лужності. Більшість бактерій пристосоване до зростання і розмноження в нейтральною або слаболужною середовищі (рН 7,0-7,6).
Для визначення реакції живильного середовища застосовують два методи: електрометричний (за допомогою рН-метра) і колориметричний. У лабораторної прак-тику найчастіше використовується найбільш простий колориметричний метод по Міхаелісу, заснований на зміні кольору індикатора внаслідок дисоціації його в залежності від концентрації водневих іонів в середовищі. При визначенні рН по Міхаелісу застосовують індикатори нітрофенолового ряду. З огляду на те, що для вирощування мікробів готують середовища слаболужною реакції, при визначенні рН середовища в якості індикатора використовують метаннітрофенол, який дозволяє визначати рН в межах від 6,8 до 8,4. Розчини індикатора готують на дистильованої воді і зберігають у флаконах з темного скла з притертою пробкою.
Склад поживних середовищ.
Як культивують в лабораторних умовах мікроорганізми?
Які бувають поживні середовища по консистенції?
Як розрізняють живильні середовища за походженням?