Виділення вірусів з матеріалів

Виділення вірусів з матеріалів. Виділення вірусів в курячому ембріоні

Найчастіше з матеріалів віруси виділяють в культурах клітин і курячих ембріонах, рідше ними заражають експериментальних тварин.
Виділення вірусів в культурах клітин. У більшості випадків віруси людини і тварин виділяють на первинних культурах нирок ембріонів людини і мавп або ж на перещеплюваних культурах клітин HeLa, нер-2, KB, Vero, FL. При цьому досліджуваним матеріалом заражають лише ті з них, в яких під малим збільшенням мікроскопа спостерігається хороший моношар клітин. Після 30-60-хвилинного контакту з монослоем матеріал видаляють і його знову покривають живильним середовищем, поміщаючи на кілька діб в ультратермостат.

Про розмноження вірусів в клітинах судять по цитопатическим змін в монослое, зреалізований в округленні і сморщивании клітин (пікорнавіруси), наростаючою деструкції (герпесвіруси), нерідко з первісної пролиферацией (поксвирусов). Пікорна-, герпес-, багато тога- і буньявірусов, руйнуючи моношар, утворюють під агаровим покриттям бляшки ( «стерильні плями»), кожна з яких представляє собою відокремлену колонію вірусу.

При розмноженні деяких вірусів утворюються багатоядерні клітини (параміксо- і герпес-віруси). Цілий ряд вірусів в цитоплазмі і ядрі формують внутрішньоклітинні включення округлої форми. Онкогенні віруси викликають трансформацію нормальних клітин в злоякісні, чому нерідко передують хромосомні зміни в ядрах моношару. Уражені інфекційними вірусами клітини зазвичай містять величезну кількість незрілих віріонів і їх антигенів, які виявляють за допомогою флуоресцентних антитіл.

Якщо віруси мають великі розміри і, розмножуючись, отщепляются від клітин, то по змісту клітинного пласта під іммерсійним мікроскопом, як уже зазначалося, виявляються елементарні тільця.

Розмноження вірусів. що не володіють цитопатичної дії (ЦПД), можна встановити за допомогою реакції гемадсорбції, що виявляється в скучіваніе доданих еритроцитів на інфікованих клітинах внаслідок наявності у багатьох вірусів гемагглютининов (міксо- і тогавирусов). Гемаглютинацію можна побачити і неозброєним оком на предметному склі, додавши до краплі культуральної рідини відповідні еритроцити. Наприклад, міксовіруси гемагглютинирующих еритроцити людини, 1-ї групи крові, а 60% тогавирусов - еритроцити гусей.

Ряд вірусів можна виявити по феномену інтерференції, т. Е. Здібності пригнічувати ЦПД іншого вірусу (віруси лейкозу птахів интерферируют з вірусом саркоми Рауса). При цьому, правда, треба виключити явище аутоінтерференціі.

Виділення вірусів в курячому ембріоні. Для виділення вірусів з матеріалів використовуються 7-11-денні ембріони білих курей. Зараження виробляють на хоріоналлантоісной оболонку (ХАО), в аллантоісную і амніотичну порожнини, жовтковий мішок і тіло зародка. При цьому вибір способу інфікування залежить від специфічних властивостей вірусів.

Перед зараженням яйце поміщають в овоскоп і, визначивши життєздатність ембріона і кордони повітряного мішка, спиртом і йодом обробляють над ним шкаралупу. Найбільш поширений спосіб введення матеріалу на ХАО. Для цього збоку від повітряного мішка ножицями знімають шкаралупу і злегка надривають шкаралуп'яну оболонку. Внаслідок тиску повітря ХАО западає і на неї шприцом наносять 0,1-0,2 мл досліджуваного матеріалу. Проколюючи ХАО і погрожує голку на 1-2 мм, тією ж кількістю матеріалу заражають аллантоісную порожнину.

Для введення матеріалу в амніотичну порожнину складеними браншамі пінцета обережно проколюють хоріоналлантоіс, захоплюють амниотическую оболонку, піднімають і після введення в її порожнину 0,05-0,10 мл матеріалу опускають.