Штам бактерій morganella morganii - продуцент термолабільного ентеротоксину

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання термолабільного ентеротоксину і анатоксину Morganella morganii при виробництві вакцин. Штам Morganella morganii N 2223 виділено від хворої дитини з кишковою інфекцією, депонований в колекції Державного науково-дослідного інституту стандартизації та контролю медичних і біологічних препаратів ім. Л.А.Тарасевіча і має реєстраційний номер 240. Штам бактерій Morganella morganii ГИСК 240 є продуцентом термолабільного ентеротоксину. Штам має підвищену токсінпродуцірующей здатністю. Штам стійкий до пеніциліну, тетрацикліну, гентаміцину, стрептоміцину, метициліну. Штам має високу токсінпродуцірующей способносностью. 1 табл.

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання термолабільного ентеротоксину (ЛТ-ентеротоксину) і анатоксину M. Morganii; при виробництві вакцин.

Метою винаходу є штам Morganella morganii N 2223, що володіє підвищеною токсінпродуцірующей здатністю.

Штам Morganella morganii N 2223 виділено від хворої дитини з кишковою інфекцією, депонований в колекції Державного науково-дослідного інституту стандартизації та контролю медичних і біологічних препаратів ім. Л.А.Тарасевіча і має реєстраційний номер 240.

Штам M. Morganii ГИСК 240 характеризується наступними ознаками: Морфологічні ознаки. При фарбуванні за Грамом - грамнегативні палички розташовуються в мазку окремо або попарно.

Культуральні ознаки. При вирощуванні на 1,5% -ному мясопептонном агарі (pH 7,2 - 7,4), що містить 5% еритроцитів кролика, при температурі 35 - 36 o C штам зростає з великих колоній, що мають рівні краї. При вирощуванні в бульйоні Хоттингера (pH 7,2 - 7,4), температура 35 - 36 o C, протягом 20 год дає дифузне помутніння і ніжну плівку на поверхні середовища.

Утворює фенілаланідезаімназу і індол, не ферментує лактозу і ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, розщеплює сечовину, продукує орнітиндекарбоксилази.

Серологічні властивості. Серотип 01ab.

Способи визначення активності ЛТ-ентеротоксину. Субплантарное введення мишам вагою 15 - 16 г 0,05 мл центрифугата 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки не менше 140 (Аксьонова О.В. 1980).

Інтраназальне введення 0,05 мг 20-годинний бульонной культури викликає загибель 95% мишей-самців вагою 15 - 16 г протягом 20 хв при виразкових тонічних судомах і асфіксії (Войно-Яеснецкая Н.К. 1957).

Внутрішньом'язове введення 300 млн. Мікробних клітин 20-годинний бульонной культури викликає некроз шкіри кролика діаметром 3,5 см.

Під час експерименту петля тонкої кишки кролика дає позитивний результат V / l = 1,1.

Гріти при 56 o C протягом 45 хв центрифугат 20-годинний бульонной культури викликає "набряк лапки" мишей до 30 мг, не викликає некрозу шкіри кролика. Гріти при 100 o C 20-годинна бульйонна культура не викликає накопичення рідини в ізольованій петлі тонкого кишечника кролика (V / l = 0,3).

Умови зберігання культури після леофільной сушки або вирощеної в 0,3% -ному МПА (pH 7,2 - 7,4), залитому стерильним вазеліновим маслом, при температурі 4 o C.

Середовища для розмноження - бульйон Хоттингера (pH 7.2 - 7,4), що містить 5% еритроцитів кролика при температурі 35 - 36 o C протягом 20 год.

Генетичні особливості: Hly +. Ent +. pen R. Стійкий до пеніциліну, тетрацикліну, гентаміцину, стрептоміцину, метициліну.

Приклад 1. 0,1 мл 1 млрд. Суспензії добової агарового культури в фізіологічному розчині сіють в стерильний бульйон Хоттингера (5 мл, pH 7,2 - 7,4) інкубують в термостаті при 36 o C протягом 20 год, центрифугують при 6000 об / хв протягом 7 хв. Отриману надосадову рідину (центрифугат) в обсязі 0,05 мл вводять субплантарно в задню лапку мишей-самців вагою 15 - 16 г. Через 24 год тварин умертвляють ефіром і ампутовані по гомілковостопного суглоба лапки зважують на торсійних вагах. При цьому центрифугат штам ГИСК 240 давав різницю між лівою і правою лапками не менше 140 мг. А решта 20 штамів, здатні продукувати ЛТ-ентеротоксини, 50 - 100 мг. Контроль - нативний стерильний бульйон Хоттингера (pH 7,2 - 7,4) і гріти при 56 o C центрифугат 20-годинний бульонной культури 30 - 35 мг відповідно.

Результати представлені в таблиці.

Приклад 2. 0,1 мл 1 млрд. Суспензії добової агарового культур сіють в бульйон Хоттингера (pH 7,2 - 7,4), інкубують в термостаті при 36 o C протягом 20 год і 500 млн.м.т. суспензію в обсязі 1 мл вводять в сегмент ізольованою петлі тонкого кишечника кролика. Через 16 год тварин умертвляли повітряної емболією і розраховували відношення обсягу ексудату до довжини сегмента (V / l). При цьому 20-годинна бульйонна культура штаму M. morganii ГИСК 240 виявилася здатною давати накопичення рідини в великому обсязі і показник V / l склав 1,1. У решти 20 штамів, здатних продукувати ЛТ-ентеротоксин, показник V / 1 коливається в межах 0,6 - 1,0. При введенні стерильного бульйону Хоттингера і грітися при 100 o C 20-годинний бульонной культури відношення обсягу наповненою рідини до довжини сегмента становило 0,25 і 0,3 відповідно.

Штам бактерій Morganella morganii ГИСК 240 - продуцент термолабільного ентеротоксину.