Правила техніки безпеки при роботі в мікробіологічній лабораторії

Лабораторна робота № 1

Техніка безпеки в мікробіологічній лабораторії. Правила роботи та оформлення лабораторних звітів. Будова грибів. Вегетативні і репродуктивні структури

Мета роботи: познайомитися з технікою безпеки в мікробіологічній лабораторії, з правилами роботи і оформлення лабораторних звітів по дисципліні «Мікологія»; вивчити особливості будови вегетативних та генеративних структур грибів.

1. познайомитися з технікою безпеки в мікробіологічній лабораторії;

2. ознайомитися з правилами роботи і оформлення лабораторних звітів по дисципліні «Мікологія»;

3. освоїти методику виготовлення тимчасових препаратів грибів;

4. вивчити особливості будови дрожжеподобного таллома грибів, видозмін вегетативних гіф, плодових тіл і суперечка.

Правила техніки безпеки при роботі в мікробіологічній лабораторії

Перебуваючи в лабораторії, необхідно виконувати наступні загальні вимоги і запобіжні заходи:

1) забороняється входити в лабораторію в верхньому одязі;

2) працювати в лабораторії - тільки в спеціальному халаті;

3) на кожному лабораторному занятті призначається черговий, який відповідає за санітарний стан лабораторії на час заняття;

4) відкривати вікна можна тільки з дозволу викладача;

5) забороняється приносити і вживати в їжу напої і продукти;

6) включати і вимикати тумблери в електричному щитку можна тільки з дозволу викладача;

7) при роботі з обладнанням і оптичними приладами в разі виявлення несправності приладів, електропроводки або розеток потрібно повідомити про це викладачеві. Забороняється самому проводити ремонт;

8) при виготовленні тимчасових препаратів обережно поводитися з ріжучими інструментами і стеклами. У разі нанесення порізів необхідно поставити до відома про це викладача (для надання медичної допомоги);

9) забороняється викидати зламані предметні і покривні скла в сміттєзбірник, оскільки необхідно складати в спеціальний контейнер;

10) для роботи з фіксованими в спирті об'єктами необхідно використовувати пінцет;

11) після закінчення роботи слід здати інструменти і відпрацьовані препарати викладачеві; мікроскопи відключити від мережі і накрити чохлами; навести порядок на робочому місці, здати черговому.

При роботі з реактивами необхідно дотримуватися таких правил:

роботу з концентрованими кислотами, лугами та отруйними речовинами можна проводити тільки у витяжній шафі; наливати або насипати реактиви слід тільки над столом; не слід залишати відкритими банки з реактивами; пролиті або розсипані реактиви потрібно негайно видалити зі столу за допомогою ганчірки і промити поверхню водою.

ЗАГАЛЬНІ МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ ЩОДО ПРОВЕДЕННЯ ЛАБОРАТОРНИХ ЗАНЯТЬ з мікології та звітність СТУДЕНТІВ

1. Студент повинен приходити на лабораторне заняття, підготувавши теоретичний матеріал по темі лабораторного заняття в обсязі програми.

2. Для роботи треба мати альбом для малювання, простий олівець (можна використовувати для замальовки також кольорові олівці), олівцеву гумку. На весь період роботи слід придбати пачку лез для безпечної бритви.

3. Альбом повинен вестися акуратно і бути підписаний:

для лабораторних занять з дисципліни «Мікологія»

студента II курсу, 2220 групи

4. На кожному занятті треба вказувати в альбомі номер заняття, дату, назву теми.

5. Всі об'єкти повинні бути ретельно розглянуті спочатку при малому (об'єктив Ув. Х 4), потім при великому (об'єктив Ув. Х 10; Ув х 40) збільшенні і акуратно замальовані із зазначенням їх систематичного положення.

При недбалому веденні альбому відпрацьований лабораторне заняття не зараховується.

6. Перед приготуванням тимчасового препарату слід протерти серветкою покровное і предметне скло. Нанести на предметне скло краплю води. Намагатися, щоб крапля була в центрі і не сильно розтікалася по склу.

7. Помістити в краплю води розглянутий матеріал (міцелій, наліт спороносних структур і т.п.) і ретельно його розправити за допомогою препаровальной голки. Для кращої смачиваемости розглянутого матеріалу іноді доцільно використовувати оцтову кислоту.

8. Щоб розглянути щільні структури, необхідно приготувати зріз об'єкта. Для цього об'єкт поміщають в розщеплену серцевину бузини або, якщо об'єкт досить твердий, ріжуть його безпосередньо. Об'єкт тримають в лівій руці строго вертикально, лезо - великим і вказівним пальцями правої руки строго горизонтально. Лезо плавно переміщають, не напружуючи руку. Приготований зріз поміщають в краплю рідини. Необхідно зробити кілька зрізів, щоб мати можливість вибору.

9. Покривати зріз покривним склом слід обережно: спочатку торкнутися рідини краєм скла, а після плавно опустити скло. Рідина повинна рівномірно розтектися. Якщо під склом виявляться бульбашки повітря, слід обережно постукати препаровальной голкою по склу або злегка підняти скло голкою і знову опустити. Покривне скло повинне щільно прилягати до предметного. Зайву рідину слід прибрати за допомогою фільтрувального паперу. Якщо рідини під склом недостатньо, необхідно додати її, помістивши за допомогою піпетки краплю біля покривного скла.

10. Малюнки розташовуються тільки з одного боку альбомного листа не більше 3-4 на сторінку.

11. Малюнок повинен виконуватися безпосередньо з даного об'єкту простим олівцем, бути досить великим, виразним, мати під рисунком підпис, наприклад: Будова гимен сироїжки (Russula sp.).

12. Всі деталі малюнка повинні бути чітко позначені. Вказівні стрілки ставляться простим олівцем; написи розташовуються тільки по горизонталі.

13. На вимогу викладача студент повинен здавати альбом для перевірки.

14. Студенти зобов'язані дбайливо ставитися до мікроскопічної техніки, матеріалів і всього обладнання, яке їм надається для виконання лабораторної роботи.

15. Студенти повинні суворо дотримуватися правил техніки безпеки, обережно поводитися з колючими і ріжучими предметами, фіксованим матеріалом і реактивами.

16. Студент зобов'язаний відпрацювати всі лабораторні заняття і здати звіти з лабораторних робіт і по контролю самостійної роботи. Пропущені лабораторні заняття (незалежно від причини пропуску) треба відпрацювати. Графіки відпрацювання складаються за погодженням з викладачем.

17. Після виконання програми лекційних та лабораторних занять студент допускається до складання іспиту з теоретичного курсу.

Теорія. Будова вегетативного тіла грибів. Тіло переважної більшості грибів є міцелій, що складається з тонких безбарвних трубчастих ниток, або гіф, з верхівковим ростом і бічним розгалуженням. У ряду грибів міцелій позбавлений перегородок (нечленістие, несептірованний або ценоцітний) і являє собою як би одну гігантську, часто сильно розгалужену клітину з великою кількістю ядер. Ценоцітний міцелій відомий у багатьох водних (сапролегнія і ін.) І наземних грибів (мукор, різопус і ін.). Деякі представники грибів утворюють лише зачатки міцелію у вигляді тонких без'ядерних ниток - різоміцелій.

У більшості грибів гіфи міцелію розділені поперечними перегородками, або септах, на окремі клітини. Такий міцелій називають септірованного, або клітинним. Перегородки у грибів утворюються шляхом інвагінації (впячивания) плазматичноїмембрани всередину клітини, до її центру (центріпетальной), де завжди залишається невеликий отвір - пора. Пори забезпечують тісний контакт між клітинами міцелію за рахунок взаємного переміщення поживних речовин і навіть міграції органел (ядра, мітохондрії і т.д.).

Дріжджі, як і гриби-внутрішньоклітинні паразити, міцелію не мають. Вегетативне тіло дріжджів складається з одиночних брунькуються або клітин, які діляться, а у внутрішньоклітинних паразитів - з голого протопласта без клітинної стінки. Таке вегетативне тіло зазвичай недовговічне, через кілька днів воно перетворюється в зооспорангием з рухомими спорами, які знову заражають відповідного господаря.

З филогенетических позицій найбільш досконалою формою тіла гриба є септірованний міцелій, який має необмежений зростання за рахунок поділу клітин і здатний тим самим ефективно використовувати субстрат.

Крім того, міцелій диференціюється на дві функціонально різні частини: субстратної, службовець для прикріплення до субстрату, поглинання і транспортування води і розчинених в ній поживних речовин, і повітряний, що піднімається над субстратом і утворює органи розмноження.

У процесі життєдіяльності у грибів виникають численні пристосування до різних умов їх проживання за рахунок видозміни міцелію в помилкову тканина - плектенхіму або міцеліальні тяжі, різоморфи, склероции і ін.

Плектенхіма на відміну від справжньої тканини, що утворюється при діленні клітин у всіх напрямках, формується в результаті переплетення і зрощення ниток міцелію, кожна з яких ділиться тільки в одному поперечному напрямку. З плектенхіми складаються плодові тіла шапинкових грибів.

Міцеліальні тяжі є щільно склеєні слизових речовиною пучки гіф товщиною до декількох міліметрів. Вони добре помітні біля основи великих плодових тіл шапинкових грибів, трутовиків, гастероміцетов у вигляді білуватих або забарвлених ниток. За ним протікають вода і поживні речовини.

Добре розвинені і диференційовані міцеліальні тяжі отримали назву різоморф. Їх зовнішні гіфи мають потовщені Темна стінки і виконують захисну функцію, а внутрішні (тонкостінні і светлоокрашенние) - провідну. Різоморфи можуть досягати декількох метрів в довжину, дозволяючи грибам долати значні перешкоди, наприклад ділянки кам'яних стін (домовик гриб) або сухі стовбури дерев (осінній опеньок). За допомогою різоморф опеньок легко переміщується від дерева до дерева і викликає їх зараження. Крім того, він здатний формувати плодові тіла на деревах на висоті 2-3 м і більше над землею.

Склероції - щільні переплетення гіф міцелію - служать для перенесення несприятливих умов взимку, під час посухи і т. Д. Вони мають різні форми (кулясту, овальну, у вигляді ріжків та ін.), Розміри (від 1 мм до 20-30 см в діаметрі) і масу (до 20 кг). Клітини склероциев багаті запасними поживними речовинами - гликогеном, жирами. У склероциев ріжків, наприклад, міститься до 30% жиру. Склероції утворюють багато сумчасті, базидіальних і недосконалі гриби. Формируются они либо свободно на поверхности мицелия, либо внутри пораженного органа. З склероциев розвиваються міцелій або органи спороношення.

Існують і інші пристосувальні видозміни міцелію у грибів - гаустории, аппрессоріі, Ризоїди, столони, пастки і ін. Пов'язані зі способом їх харчування. Например, гаустории характерны для паразитов и представляют собой специальные веточки мицелия, проникающие в клетки хозяина и поглощающие из них питательные вещества.

Будова клітини. Клітка більшості грибів і грибоподібних організмів одягнена щільною оболонкою, що складається в основному (на 80-90%) з полісахаридів, пов'язаних з білками і ліпідами. Крім того, до її складу входять азотвмісний полісахарид хітин (у зігомікот, аскомікот, базидіомікотові і анаморфное грибів), поліфосфати, пігменти, меланіни, глюкан і інші речовини. У оомікот клітинна стінка включає целюлозу.

Протопласт клітин містить одне або кілька ядер, мітохондрії, ендоплазматичну мережу, рибосоми, лізосоми, вакуолі, а також специфічні для них структури у вигляді бульбашок - ломасоми, які утворюються між клітинною стінкою і плазматичноїмембраною. Функція Ломас ще остаточно не встановлена. Комплекс Гольджі виявлений у невеликого числа грибів (деякі представники хитрідіомікотові гриби). Він типовий для грибоподібних організмів

Запасними поживними речовинами є глікоген, дисахарид трегалоза, сахароспирти (маніт, сорбіт, ксиліт), волютин, масло. Крохмаль в клітинах не утворюється.

Завдання 1. Вивчіть будову дрожжеподобного таллома.

Хід роботи. На предметне скло піпеткою нанесіть краплю суспензії пекарських дріжджів Saccharomyces cerevisiae (заграв рідини).

Акуратно покладіть зверху покривне скло. Розгляньте отриманий препарат при великому збільшенні (10 х 40, 10 х 10).

Замалюйте: будова талому пекарських дріжджів.

Позначте на малюнку цитоплазму, клітинну стінку.

Завдання 2. Вивчіть будову грибів, міцеліальних тяжів Lycoperdon sp.

Хід роботи. Внимательно рассмотрите кусок древесины или коры дерева, на котором образовались плодовые тела дождевиков - Lycoperdon sp.

Знайдіть на ньому відходять від плодових тіл довгі ниткоподібні структури - міцеліальні тяжі. Відокремте невеликий фрагмент міцеліальні тяжа, помістіть його в краплю води на предметному склі і злегка растеребіть препаровальной голками. Потім накрийте покривним склом і розгляньте отриманий препарат при малому (4 х 10) і великому (10 х 40) збільшенні.

Замалюйте: будова гіф, що становлять міцеліальних тяж.

Позначте на малюнку клітинну стінку, септи, цитоплазму.

Завдання 3. Вивчіть будову грибів, плектенхіми.

Хід роботи. Приготуйте зріз. Для цього необхідні два леза безпечної бритви. Одне з них може бути не особливо гострим, так як їм на предметному склі буде фіксуватися об'єкт. Второе лезвие должно быть острым (или же его можно заменить скальпелем). Відріжте від капелюшка гриба Agaricus bisporus (Печериця Садова) фрагмент розміром приблизно 1 х 5 х 10 мм. Покладіть його на предметне скло і лівою рукою притисніть його за допомогою леза безпечної бритви так, щоб з-під краю леза виступав лише невелику ділянку фрагмента капелюшки. Затем острым лезвием или скальпелем отсеките этот выступающий участок. Таким чином, вийде рівний зріз фрагмента капелюшки. Потім злегка, на долі міліметра, відсуньте вбік притискає лезо і гострим лезом відріжте ділянку, що звільнилася. Вийде тонкий зріз капелюшка гриба. Його необхідно перенести в краплю води, накрити покривним склом і розглянути при великому збільшенні (10 х 40).

Замалюйте: взаємне розташування гіф, що утворюють волокна плектенхіми капелюшки плодового тіла Agaricus bisporus.

Позначте на малюнку клітинну стінку, септи, цитоплазму.

Контрольні питання і завдання:

1. Опишіть особливості організації різних типів талломов грибів.

2. Який тип організації таллома мають пекарські дріжджі?

3. Як називаються поперечні перегородки в гифах грибів?

4. Які видозміни вегетативних гіф Вам відомі?

5. Яка будова мають міцеліальні тяжі?

6. Яку будову має плектенхіма капелюшки Agaricus bisporus?