Персональний сайт - побудова калібрувального графіка

Побудова калібрувального графіка.

Для побудови калібрувального графіка з основного стандартного розчину білка готують 3 серії робочих стандартних розчинів (тобто для кожної концентрації роблять не менше 2 - 3 визначень), як зазначено в табл. 1 (0,1 мл основного стандартного розчину містить 0,01 г білка). З кожного розведення беруть по 0,1 мл робочого розчину і вносять у пробірки, що містять 5,0 мл робочого біуретового реактиву. Через 30-60 хв заміряють оптичну щільність стандартних і досвідчених проб проти біуретового реактиву.

Вимірювання абсорбції починають виробляти з розчину меншої концентрації.

Побудова калібрувального графіка для визначення

загального білка сироватки крові

Стандартний розчин білка, мл

Фізіологічний розчин NaCl, мл

Концентрація білка, г / л

За отриманими даними будують калібрувальний графік на міліметровому папері. На осі абсцис (горизонтальної) позначають значення концентрацій, на осі ординат (вертикальної) - середні значення екстинкції, відповідні взятим концентрацій білка. Через отримані точки (а при необхідності - між ними) проводять пряму лінію. Масштаб вибирають так, щоб лінія розташовувалася під кутом, близьким до 45 0 (рис. 1).

Іноді характер графіка для більшості концентрацій білка кілька відхиляється від прямої лінії, проте якщо результати стабільно повторюються, такий графік цілком придатний для роботи.

Калібрувальну криву потрібен час від часу перевіряти. При цьому досить перевірити 2 - 3 точки. Якщо вони укладаються на колишньому графіку, то він не переробляється. Для полегшення підрахунків складають таблицю або обчислюють коефіцієнт перерахунку F розподілом концентрації білка на абсорбцію F = Сcm / Ecm.

Фактор перерахунку F використовують для розрахунку концентрації білка в досліджуваній пробі. Для цього екстинкцію (абсорбцію) проби Еоп множать на коефіцієнт перерахунку F.