Фіксування мазків крові

Фіксування мазків крові. Забарвлення мазків крові

Для закріплення матеріалу на склі висушений мазок піддають фіксації, яка заснована на згортання білкових речовин. Мазки слід піддавати фіксації відразу після висушування. Без фіксації вони псуються.
Фіксація досягається нагріванням або обробкою певними рідинами.

Висушені мазки крові можна раніше фіксувати, а потім фарбувати або дати фіксацію одночасно з фарбуванням.
Для фіксації застосовують: а) метиловий спирт хімічно чистий, 3-5 хвилин; б) метиловий спирт і ацетон в рівних частинах, 3-5 хвилин; в) суміш Никифорова (етиловий спирт ректифікат і ефір порівну), 10-20 хвилин; г) 1% осмієва кислота; д) абсолютний алкоголь, 20-30 хвилин.

Дуже добре фіксуються мазки крові наступним розчином: 5 г сірчанокислого цинку, 5 г хімічно чистого хлористого натрію всипати в мірний циліндр або в колбу на 100 мл і додати до мітки дистильованої води. У цьому розчині мазки фіксують 2-3 хвилини, після чого їх відразу фарбують.

Для фіксації мазки занурюють в скляну вузьку посуд (кювету), наповнену кожній із зазначених рідин. Мазки треба покласти так, щоб вони не торкалися намазаними сторонами і щоб добре покривалися рідиною. Кювету прикривають. Після зазначеного часу мазки виймають пінцетом і ставлять вертикально на фільтрувальний папір для просушування.

Забарвлення мазків крові. Забарвлення за Романовським-Гімза. У 1891 р Д. Л. Романовський запропонував метод забарвлення крові, який полягає в тому, що при фарбуванні крові сумішшю метиленової синьки з еозином в певній пропорції протоплазма лейкоцитів забарвлюється в сині кольори, а ядра в різні відтінки червоно-фіолетового кольору. Еритроцити фарбуються при цьому в рожевий колір.

При фарбуванні крові цими фарбами окремо еозин забарвлює протоплазму в рожевий колір, а метиленовая синька забарвлює ядра в синій колір. Було встановлено, що суміш цих двох фарб при стоянні утворює нову речовину - АЗУР, при фарбуванні яким легко можна розрізнити різні клітини крові.
Згодом ці властивості використовували для приготування фарби Гімза, Райт, Паппенгейм і ін.

Для фарбування мазків крові за Романовським-Гімза фарбу розводять дистильованою водою обов'язково нейтральній реакції з розрахунку 1-2 краплі на 1 мл води.

Фарбу треба розводити безпосередньо перед фарбуванням. Від довгого стояння розчин фарби псується. Для розведемо ня необхідно мати абсолютно чистий посуд - градуйований циліндр, який слід відразу після фарбування добре промити дистильованою водою.

Розводять фарбу з розрахунку приблизно 2,5-3 мл на мазок. Наливають в призначений для цього чистий циліндр необхідну кількість дистильованої води і піпеткою або крапельницею додають в воду стільки крапель фарби, скільки мілілітрів води взято, з розрахунку 1 крапля на 1 мл. Якщо при перевірці фарби виявилося, що потрібно взяти 3 краплі фарби на 2 мл води або 2 краплі на 1 мл, то відповідним чином вираховують необхідну кількість крапель для даної фарби.

Розведену фарбу добре змішують і наливають на сухі фіксовані препарати Через 25-30 хвилин залишки фарби зливають, змивають водою, краще дистильованою. Мазки ставлять вертикально на фільтрувальний папір для просушування.

У випадках необхідності можна приготувати фарбу за Романовським з сухого порошку фарби. Розчин, приготовлений з 3,8 г сухої фарби і 250 мл ректифікованого етилового або метилового спирту, залишають на 4-5 днів, збовтуючи 3-4 рази на день. Потім в розчин вливають 250 мл чистого гліцерину і знову, часто збовтуючи, залишають на кілька днів, після чого розчин можна застосовувати, попередньо випробуємо розведення різної кількості крапель фарби на 1 мл води, а також і різний час забарвлення.