Діагностика хромосомних захворювань

Для підтвердження (або встановлення) діагнозу хромосомної хвороби використовують цитогенетичні методи. Найбільше значення мають:

2.Метод визначення статевого хроматину.

Дозволяє вивчити каріотип в цілому (тобто число і структуру хромосом). Каріотип вивчають в клітинах, що діляться на стадії метафази мітозу, тому що в цій стадії хромосоми максимально спіралізують і добре видно в світловий мікроскоп. Препарат метафазних хромосом називається метафазної платівкою. Для діагностики біль-шинства хромосомних хвороб метафазні пластинки виготовляють з лімфоцитів периферичної крові. Придатні також фібробласти шкіри, клітини червоного кісткового мозку. Для пренатальної діагностики культивують клітини амніотичної рідини, ворсин хоріона, плаценти, ембріональні тканини.

Розглянемо отримання метафазної пластинки з лімфоцитів пе-ріферіческой крові.

Для кариотипирования використовують венозну кров (I-2 мл) або з пальця. Кров поміщають в спеці-ву живильне середовище (середа 199 "Голка" і ін.) З фитогемагглютинином / ФГА /. ФГА отримують з бобових рослин, він викликає імунологічну трансформацію лейкоцитів і їх розподіл. Культуру примі-ють в термостат на 48-72часа.

За 2-3часа до кінця культивування додають колхіцин (або колцемідом). Колхицин отримують з рослини безвременника весняного. Він руйнує веретено поділу і зупиняє поділ клітин на стадії метафази. Наступний етап виготовлення препарату-обробка клітин гипотоническим розчином хлориду калію або нітрату натрію. У гіпотонічному розчині клітини набухають, міжхромосомні зв'язку рвуться і хромосоми вільно плавають в цитоплазмі. Клітинну суспензію фіксують і наносять на предметне скло. При висиханні фік-сатора клітини і хромосоми міцно прикріплюються до скла. Препарат забарвлюють найчастіше за Романовським-Гімзою. Таке забарвлення називаючи-ється простий або рутинної. Всі хромосоми забарвлюються рівномірно по всій довжині. Рутинна забарвлення дозволяє підрахувати число хромо-сом, розподілити їх за групами і виявити грубі хромосомніаберації.

Для тонкої діагностики хромосомної аберації з середини 70-х років використовують метод «диференціальної забарвлення хромосом».

Найбільш широко використовують G-забарвлення. Хромосоми перед окрас-кою за Романовським-Гімзою попередньо обробляють протеазами (трипсином). Хромосоми після забарвлення стають смугастими. Чере-нання темних і світлих смуг індивідуально в кожній парі хромо-сом. Припускають, що темні смуги -гетерохроматіновие ділянки, а світлі -еухроматіновие.

Визначення статевого хроматину. Статевий хроматин це спіралізує Х-хромосома. Одна з Х-хромосом у жінок інактивується на16-19суткі ембріонального розвитку, а друга залишається активною. Спіралізує Х-хромосома виявляється в ядрах соматичних клітин у вигляді темної, добре забарвлюється грудочки.

Методика визначення статевого хроматину в буккальном соскобе наступна. Після попереднього полоскання ротової порожнини сто-матологіческім шпателем беруть зішкріб епітелію внутрішньої поверхонь-сти щоки у корінних зубів. Зішкріб наноситься рівномірним шаром на предметне скло, забарвлюється в протягом 2 хвилин ацетоарсеіном, за-тим покривається покривним склом. Надлишки фарби видаляють за допомогою на-гою фільтрувального паперу. Підрахунок тілець статевого хроматину прово-дять під иммерсией в круглих або овальних ядрах з непорушеною ядер-ної мембраною. У нормі у жінок виявляють статевої хроматин в понад 20% клітин, а у чоловіків він в нормі відсутній.

Метод використовують для діагностики хромосомних хвороб, свя-чених зі зміною числа Х-хромосом.

Існує також методика визначення У-хроматину, яка використовується для діагностики синдрому полісоміі У.