реакція аглютинації

Аглютинація - це склеювання і випадання в осад мікробів або інших клітин під дією антитіл в присутності електроліту (ізотонічного розчину хлориду натрію). Групи склеєних бактерій (клітин) називають агглютінати. Для реакції аглютинації необхідні наступні компоненти:

1. Антитіла (аглютиніни), які знаходяться в сироватці хворого або імунного тварини.

2. Антиген - суспензія живих або убитих мікробів, еритроцитів або інших клітин.

3. Ізотонічний (0,9%) розчин хлориду натрію.

Реакцію аглютинації для серодиагностики застосовують при черевному тифі і паратифах (реакція Відаля), при бруцельозі (реакція Райта і Хеддлсона), туляремії і т.д. Антитілом при цьому є сироватка хворого, а антигеном відомий мікроб. При ідентифікації мікробів або інших клітин антигеном служить їх суспензія, а антитілом - відома імунна сироватка. Цю реакцію широко застосовують для діагностики кишкових інфекцій, коклюшу та ін.

Методи постановки РА

Орієнтовна РА на склі

Розгорнута РА на склі (сероідентіфікація)

Реакція аглютинації на склі. На знежирене предметне скло наносять дві краплі специфічної (адсорбированной) сироватки і краплю ізотонічного розчину хлориду натрію. Неадсорбованими сироватки попередньо розводять у співвідношенні 1: 5 - 1: 100. Краплі на скло необхідно наносити так, щоб між ними була відстань. Культуру петлею або піпеткою ретельно розтирають на склі, а потім вносять в краплю ізотонічного, розчину хлориду натрію і в одну з крапель сироватки, розмішуючи в кожній до утворення гомогенної суспензії. Крапля сироватки, в яку не внесено культура, є контролем сироватки.

Увага! Не можна переносити культуру з сироватки в краплю ізотонічного розчину хлориду натрію, яка є контролем антигену. Реакція протікає при кімнатній температурі протягом 1-3 хв. Якщо контроль сироватки залишається прозорим, у контролі антигену спостерігається рівномірна муть, а в краплі, де культура змішана з сироваткою, з'являються пластівці агглютіната на тлі прозорої рідини, результат реакції вважається позитивним.

сироватка + культура розчин + культура

Розгорнута реакція аглютинації (об'ємний метод). Готують послідовні, найчастіше дворазові, розведення сироватки. Метод називають об'ємним. Для визначення титру антитіл в сироватці крові візьміть 6 пробірок. В першу пробірку налийте 1 мл вихідного розведення сироватки 1:50 і в усі 6 пробірок градуйованою піпеткою внесіть по 1 мл фізіологічного розчину. У першій пробірці вийде розведення сироватки 1: 100 при обсязі 2 мл. З першої пробірки 1 мл перенесіть в другу пробірку, де розведення стане 1: 200. Так зробіть ряд послідовних розведень сироватки в 5 перших пробірках (1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1600). З п'ятої пробірки 1 мл вилийте в дезінфікуючий розчин. У всі 6 пробірок додайте по 2 краплі диагностикума. Шоста пробірка є контролем культури, так як містить тільки фізіологічний розчин і діагностикумів.

Такий контроль необхідний для виключення спонтанної аглютинації культури. Пробірки струшують і поміщають в термостат при температурі 37 ° С на 2 години, а потім залишають на добу при кімнатній температурі, після чого виробляють облік результатів реакції аглютинації. При постановці реакції аглютинації з сироватками дітей перших місяців життя в зв'язку з функціональною неповноцінністю антителообразования необхідно виявлення нижчих титрів антитіл, що враховується при розведенні сироватки. Початкове розведення сироватки беруть 1:25. У першій пробірці отримують розведення 1:50, потім 1: 100 і т.д.

При позитивному результаті реакції в пробірках видно склеевшіеся клітини у вигляді зерен або пластівців на тлі прозорої рідини. Агглютінати поступово осідає на дно у вигляді «парасольки», а рідина над осадом прояснюється. Контроль антигена рівномірно мутний.

За характером осаду розрізняють дрібно- і грубозернисту (пластівчасту) агглютинацию. Дрібнозерниста аглютинація виходить при роботі з О-сироватками. Грубозерниста - при взаємодії рухомих мікробів з жгутиковими Н-сироватками. Вона настає швидше дрібнозернистої, що утворюється при цьому осад дуже пухкий і легко розбивається.

Інтенсивність реакції виражається наступним чином:

++++ всі клітини осіли, рідина в пробірці абсолютно прозора. Результат реакції різко позитивний;

+++ осад менше, немає повного просвітлення рідини. Результат реакції позитивний;

++ осад ще менше, рідина мутніше. Результат реакції сумнівний;

на дні пробірки незначний осад, рідина каламутна. Сумнівний результат реакції;

- осаду немає, рідина рівномірно каламутна, як в контролі антигену. Негативний результат реакції