Отримання тканинної первинної культури

На першому етапі отримання первинної культури відбувається стерильне видалення фрагмента тканини тваринного і його механічна або ферментативна дезінтеграція. Тканина може бути просто подрібнена до дрібних шматочків, які прикріплюються поверхні чашки завдяки власній адгезивність, наявності насічок на чашці або за допомогою згустку плазми. У цих випадках буде відбуватися ріст клітин з фрагментів і клітини, мігруючі з експлантатов, можуть використовуватися для пасирування. Таким чином, наприклад, можна отримувати культуру клітин дерми - фібробластів.

Первинна культура може бути також отримана шляхом дезінтеграції тканин ферментами, наприклад трипсином або колагеназою. Клітини утворюється при цьому суспензії осідають, прикріплюються і розпластуються на поверхні скла або пластику. Так отримують клітини епітелію, деякі клітини ембріонів.

Субкультівірованія первинної культури.

Після того, як первинна культура досягне стану моношару, вона може бути перенесена в другій культуральний посудину після дисоціації клітин моношару трипсином і розведення, тобто пересіяна або субкультивована.

Для суспензійних культур в разі субкультівірованія досить тільки розведення.

Дисоціація клітин монослойной культури досягається промиванням моношару фосфатним сольовим буфером (ФСБ) або ФСБ з 1 мМ етилендіамінтетраацетат (ЕДТА) і подальшої инкубацией з розчином трипсину (0,25% -ний неочищений або 0,01 0,025% -ний очищений) протягом 15 хв.

Після цього трипсин видаляється, клітини суспендують в середовищі, визначають їх кількість і зітру в нові флакони.

Заміна живильного середовища.

Як визначити, що клітинну культуру пора розсівати?

клітини утворюють щільний моношар;

індикатор-барвник змінює колір (наприклад, індикаторний барвник Phenol Red (феноловий червоний) змінює колір з яскраво-червоного в свіжому середовищі до жовто-оранжевого в середовищі з культивованими протягом деякого часу клітинами)

46) що таке стійка клітинна лінія

Стійкі (стабільні) клітинні лінії (established cell lines) [лат. stabilis - стійкий; лат. linea - розташування чого-небудь в один ряд] - культури клітин, здатні до необмеженого ростуin vitro. Виходять з перевіваемих клітинних культур, частина клітин яких набуває селективні переваги і має підвищену швидкість росту

In vitro (лат. «В склі») - це технологія виполненіяексперіментов, коли досліди проводяться «впробірке» - поза жівогоорганізма. У загальному сенсі цей термін протиставляється термінуin vivo - експеримент на живому організмі (на людину або на тваринної моделі). Багато експерименти, які мають відношення кмолекулярной біології, біохімії, фармакології, медицині, генетиці ін. Проводяться поза організмом, на культурі жівихклетокілі вбезклітинних моделі.

Експерименти in vitro. в тих випадках, коли альтернативою є дослідження на тваринах або людині, вважаються менш достовірними, чемin vivo [1] і часто бувають лише необхідною попередньою стадією для оцінки можливості і необхідності подальших ісследованійin vivo [2]. Однак вони часто здешевлюють попередні стадії дослідження і дозволяють зберегти життя піддослідних тварин.