Методи гістологічних досліджень клітин і тканин
Гістологічні та ембріологічні дослідження нерозривно пов'язані і даним методом. Найбільш часто в цих дослідженнях використовується світловий мікроскоп. Крім звичайного світлового мікроскопа, в гістології та ембріології використовуються мікроскопи спеціального призначення:Фазово-контрастні і інтерференційні мікроскопи з конденсором темного поля служать для дослідження незабарвлених клітин і тканин. Люмінесцентні мікроскопи використовуються для дослідження природної і штучної люмінесценції клітин і тканин. Поляризаційні мікроскопи призначені для дослідження ультраструктури клітин, що мають закономірні, регулярні структури. Електронні і растрові використовуються для дослідження ультраструктури клітин. Стереосканние мікроскопи дають об'ємне зображення об'єкта дослідження.
Досить поширений метод в гістології, коли розглядаються цілі, нерозчленованих об'єкти, а самі препарати називаються тотальними. До тотальним препаратів можуть бути віднесені кров, лімфа, статеві клітини, зародки ранніх стадій розвитку, тонкі плівки тканин рослин і тварин.
Для дослідження більшості об'єктів в променях світла, що проходить необхідно, щоб вони були тонкими, прозорими і контрастними. Для того щоб зробити об'єкт тонким, його необхідно розрізати на найтонші платівки, які називаються гістологічними зрізами. Щоб об'єкт зберіг по можливості прижиттєве будова, його фіксують, а для того, щоб зробити його контрастним, використовують даний метод.
Метод фіксованих і забарвлених постійних препаратів
Даний метод є основним, або класичним. Для їх виготовлення об'єкт дослідження прогружаются в фіксують рідини, які денатурують білки і стабілізують певні структури і з'єднання, які підлягають дослідженню. Найбільш поширеним фіксатором є формалін. Він зшиває білки метиленовими містками, викликаючи їх денатурацію. Після фіксування і промивання у воді об'єкт дослідження можна різати на тонкі пластинки, попередньо заморозивши його на спеціальному заморожувати мікротому # 151 приладі, за допомогою якого виготовляють гістологічні зрізи. Для заморожування об'єкта найчастіше використовують рідкий вуглекислий газ або електрозаморажівающую установку. Однак при такому методі обробки матеріалу отримують досить товсті гістологічні зрізи. Для виготовлення більш тонких зрізів, товщиною до 2 мкм, об'єкт дослідження необхідно просочити речовиною, яке зробило б його більш щільним. Такими речовинами є парафін, желатин і целлоидин. Об'єкт після фіксування і промивання занурюють послідовно в спирти зростаючої концентрації # 151 від 50 до 100 градусів для його зневоднення і просочують желатином, парафіном або целлоидин. Після просочування і ущільнення об'єкта його можна різати на мікротому.Гістологічні зрізи потім фарбують спеціально підібраними барвниками, більшість з яких вибірково забарвлює структурні компоненти клітин і тканин. Всі барвники можна розділити на три групи:
Після фарбування гістологічні зрізи швидко зневоднюють в спиртах, просвітлюють в ксилолі або толуолі, переносять на предметне скло, заливають тонким шаром канадського бальзами або полістиролу і накривають покривним склом. Бальзам, полістирол і скло мають однаковий показник заломлення світла, і промені світла мінімально розсіюються, проходячи через препарат.
Метод прижиттєвого або вітального фарбування клітин і тканин
Експериментальним тваринам у кров'яне русло або в черевну порожнину вводять барвники, а потім досліджують їх локалізацію в клітинах і тканинах. Отже, за допомогою цього методу досліджують структури в живих клітинах і вивчають процеси їх життєдіяльності. Найбільш поширеними вітальними барвниками є трипановий синій, нейтральний червоний, нільський синій, які вживають у великих розведеннях # 151 1. 1000 і більше.
Метод виготовлення тимчасових препаратів
Перевагою тимчасових препаратів перед постійними є швидкість їх виготовлення і можливість спостерігати живі клітини і тканини. Тимчасові препарати роблять з мазків, зіскрібків, тонких плівок, розщеплених об'єктів або шляхом розтягування стінок порожнистих органів. Об'єкти розглядають у краплі води або фізіологічного розчину, або в натуральному вигляді, або підфарбовуючи їх слабкими розчинами вітальних барвників.
Метод культури тканин
Має велике значення при вивченні процесів ембріонального гістогенезу, регенерації і трансплантації тканин. Широко застосовується в гістології та ембріології. Суть даного методу в тому, що окремі клітини певних тканин виділяють в стерильних умовах і культивують в живильному середовищі, яка складається з багатьох компонентів, необхідних для життєдіяльності клітин. Клітини теплокровних тварин культивують в термостаті при температурі тіла, а холоднокровних # 151 при кімнатній температурі. Час від часу клітини пересівають на свіжу живильне середовище і використовують протягом багатьох років для експериментів.
Використовується для проведення експериментів на клітинах, тканинах і зародках в гістології та ембріології. За допомогою таких микроопераций можна, наприклад, виділити з тканини окрему клітку, видалити з клітки ядро, перенести ядро з однієї клітини в іншу або перемістити частину клітин зародка, роз'єднати бластомери дробиться яйця. Всі ці експерименти здійснюються за допомогою приладу, який називається мікроманіпулятором. До складу цього приладу входять мікроскоп, система важелів з різним ступенем плавного регулювання. До важелів приєднуються мініатюрні інструменти: скляні капіляри, голки, гачки.
Виявляються речовини, мічені радіоактивними ізотопами. Цей метод отримав назву гистохимического або цитохимического методу дослідження.
Метод електронномікроськопічеського дослідження
Вивчення препаратів за допомогою електронного мікроскопа. В електронному мікроскопі замість пучка світла використовується пучок електронів, що рухається у вакуумі, замість оптичних частин # 151 магнітні поля, замість ока електрони потрапляють на люминесцирующий екран або на фотопластинку. Пряме збільшення електронних мікроскопів досягає 600 тис. Разів.