люмінесцентна мікроскопія
Люмінесценція, тобто світіння речовини, виникає в ре-док перетворення енергії, що поглинається речовиною, в віді-моє випромінювання. Люмінесценцією (або флуоресценції) називають таке явле-ня, коли деякі речовини під впливом падаючого на них світла промінь з іншого (зазвичай більшої) довжиною хвилі. Крім того, речовини, що мають певний колір при звичайному освітленні, при освітленні ультрафіолетовими променями слід придбати-тануть зовсім інший колір. Об'єкт, невидимий в ультрафіоле-товом світлі, може придбати яскравий блиск після обробки його флуоресцирующим речовиною (флуорохромом). В такому препа-Раті люмінесцирующие об'єкти світяться різними кольорами в темному полі зору. Сила їх світла буває різною, але найчастіше вона невелика, тому люмінесцентну мікроскопію сле-дует проводити в затемненому приміщенні.
Різниця між мікроскопією в світлі і флуоресценції полягає в тому, що в останньому випадку препарат розглядається в випромінюваному їм світлі. При цьому хімічний склад клітин і тканин впливає на якість люмінесценції і люмінесцентна мікроскопія в певній мірі є гістохімічним дослідженням. Існує пер-вічная і вторинна флуоресценція. При первинній флуоресцен-ції в самому об'єкті знаходяться речовини, здатні флуоресцен-ровать. Вторинна флуоресценція - наведена, виникає при спеціальній обробці об'єкта речовинами, здатними флуо-ресціровать. Ці речовини називаються флуорохромами (акридин помаранчевий, флуоресцеїн, родамін і ін.).
Для люмінесцентної мікроскопії застосовується цілий ряд пристроїв і мікроскопів. Основною частиною цих пристроїв є освітлювач, що має лампу ультрафіолетового світла, і система фільтрів до нього. В зави-ності від того, чи використовується ультрафіолетовий або синій колір для збудження люмінесценції, між джерелом світла і об'єктом поміщаються відповідні фільтри. Так як Люми-несценція мікроскопічного об'єкта енергетично слабкіше, ніж збудливий світло, то вона вловлюється лише в тому слу-чаї, якщо надлишок променів, що йдуть від джерела світла, відсіку-ється жовто-зеленим фільтром, поміщеним на окулярі мікро-скопа. Ефект люмінесценції найбільш повно виражений в тому випадку, коли фільтр на окулярі мікроскопа повністю отсе-кає промені, що йдуть від джерела світла. При цьому при відсутність про-наслідком люмінесцирующего препарату виходить темне поле зо-ня.
Установка для люмінесцентної мікроскопії в видимих променях складається з яскравого джерела світла і біологічного мікро-скопа (рис. 7). Між дзеркалом мікроскопа і джерелом світла устанав-ється синьо-фіолетовий світлофільтр (УФС-3, ФС-1 і т. П.). Жовтий світлофільтр (ЖС-3 або ЖС-18) надягають на окуляр мік-роскопія. За допомогою цих світлофільтрів на препарат падає синьо-фіолетове світло, збудливий люмінесценцію. Однак цей світ заважає бачити порушену їм світіння препарату і тому по шляху до ока спостерігача відсікається жовтим світло-фільтром.
Установку освітлення виробляють за методом Келера, за од-ним винятком: діафрагма конденсора повинна бути повністю відкрита. Дуже важливо застосування нефлуоресцірующіх іммерсіей-ційного масла. З метою гасіння власної флуоресценції до Кедрова або іншому Іммерсійна масла додають на 1 г від 2 до 10 крапель нитробензола.
Люмінесцентна мікроскопія знаходить широке застосування в мікробіології (рис. 8). Її перевагами є-ються: 1) кольорове зображення; 2) високий ступінь контрастності самосвітних об'єктів на чорному тлі; 3) можливість ис-проходження як прозорих, так і непрозорих живих об'єктивним тов; 4) можливість дослідження різних життєвих процес-сов в динаміці їх розвитку; 5) виявлення і встановлення локалізації окремих мікробів і вірусів; 6) розвиток тон-чайших методів цито- і гистохимии і експрес-диагно-стіки.