Лабораторна діагностика ботулізму 1

1. Експрес-метод - постановка ІФА або РПГА з еритроцитарних антитільним антитоксическим діагностикумів з метою швидкого виявлення екзотоксину в крові хворого або досліджуваному матеріалі.

2. Біологічний метод (реакція нейтралізації токсину антитоксином in vivo. Биопроба) дозволяє виявити екзотоксин в матеріалі (залишки їжі, блювотні маси, промивні води шлунка, випорожнення, кров, секційний матеріал - печінку, кишечник, шлунок). Мишам внутрішньоочеревинно вводять фільтрат матеріалу в суміші з полівалентною протівоботулініческой сироваткою А, В, Е. Інша група мишей отримує матеріал без сироватки. У тому випадку, коли тварини другої групи гинуть, ставлять розгорнуту реакцію нейтралізації для визначення типу екзотоксину.

3. Бактеріологічний метод. Матеріал засівають на середу Кітт-Тароцці, далі виробляють пересівши в високий стовпчик цукрового агару, а потім ідентифікують культуру. В реакції нейтралізації визначають екзотоксин. Токсигенність культури може бути підтверджена за допомогою ПЛР.

Лікування і профілактика

Хворим з ранніми ознаками ботулізму, а також особам, які брали заражену їжу, вводять гетерологічние протівоботулініческой антитоксичну сироватку. Коли невідомий серовар токсину, вводять полівалентної сироватку проти токсинів А, В, С, Е, а після визначення типу екзотоксину - відповідну моновалентну.

Комплексне лікування ботулізму включає промивання шлунка і інші методи детоксикації, інфузійну терапію, при необхідності виконується штучна вентиляція легенів.

Для специфічної профілактики можливе застосування анатоксинів типів А, В, Е, в тому числі в складі ряду асоційованих вакцин.

В даний час сімейство Vibrionaceae включає 8 родів бактерій. Основні патогенні представники відносяться до роду Vibrio

Провідну роль в патології людини відіграє збудник холери V. сholerae.

V. рarahaemolyticus є причиною діарейних інфекцій, V. vulnificus іноді здатний викликати раневую інфекцію і септицемию.

За морфології збудники є вигнуті рухливі палички розмірами 2-4 мкм. Суперечка не утворюють.

Вібріони поширені повсюдно: мешкають в морській і прісній воді, часто колонізують організми водних тварин (амфібій, ракоподібних, риб і ін.)

Температурний оптимум для багатьох видів 37 ° С (деякі збудники, що мешкають в морській воді, краще розмножуються при температурі 25 ° С і нижче).

При культивуванні вібріонів в середу вносять 2-3% розчин NaCl (галотолерантние мікроорганізми).

Дані бактерії - хемоорганотрофи з окислювальним і бродильних типом метаболізму.

Ферментують глюкозу та інші вуглеводи з утворенням кислоти, іноді газу. Оксидазопозитивних.

Холерні вібріони є вигнуті палички розмірами 2-4 мкм, мають один або два полярних джгутика. Вібріони дуже рухливі.

Суперечка не мають. Продукують Екзополісахариди, який бере участь у формуванні мікробної біоплівки. Представники серогрупи О139 утворюють капсулу.

Бактерії мають поліморфізмом. Типовий збудник у формі «коми» зазвичай спостерігають в зразках клінічного матеріалу. В мазках з колоній переважають паличкоподібні збудники. Іноді виникають ниткоподібні, кокковидной, булавоподібні форми. Під дією пеніциліну можуть перетворюватися в L-форми.

Добре фарбуються багатьма аніліновими барвниками, грамнегативні.

Ростуть на простих поживних середовищах в температурному діапазоні 16-40 ° С, оптимум - 37 ° С, селективними є лужні середовища з рН 7,6-9,0.

На рідких середовищах викликає помутніння і утворення ніжної блакитним плівки на поверхні. На 1% лужний пептонній воді (рН 8,8-9,0) ростуть швидко, помутніння і плівка з'являється через 6-8 годин.

На твердих середовищах (лужний агар) утворюють дрібні, прозорі, з рівними краями, блакитні в світлі колонії.

На агарі з тиосульфатом, цитратом, солями жовчних кислот, сахарозою і індикатором бромтимоловим синім (ТЦБС-агар) утворюють жовті колонії на тлі блакитно-сірою середовища. На середовищі Монсурі (лужної таурохолат-телурит-желатиновий агар) ростуть у вигляді сіро-чорних колоній.

Факультативний анаероби з більш вираженими аеробними властивостями.

Холерні вібріони біохімічно дуже активні. Ферментують з утворенням кислоти глюкозу, сахарозу, мальтозу, манозу, маніт, крохмаль, розкладають лактозу. По відношенню до трьох вуглеводів - манози, сахарози і арабінозу - все вібріони поділяють на 8 груп по Хейбергом.

Холерні вібріони розкладають манозу і сахарозу, розкладають арабинозу і належать до 1 групі Хейберга.

Виявляють протеолітичну активність: розріджують желатину у вигляді воронки, гидролизуют казеїн. Мають плазмокоагулирующей і фибринолитическим дією. Згортають молоко, розкладають білки до індолу і аміаку. Відновлюють нітрати в нітрити.

На підставі біологічних відмінностей холерні вібріони поділяють на 2 биовара: класичний і Ель-Тор. Особливістю вібріона Ель-Тор є здатність гемолізовані еритроцити, в зв'язку з чим його відносять до гемолітичних вібріонам.

У холерних вібріонів є термостабільний О-антиген і термолабільних жгутикових Н-антиген. Жгутиковий Н-АГ є загальним.

За структурою О-АГ виділяють до 200 серогрупп. Обидва биовара збудників холери відносяться до серогрупи О1.

Було встановлено, що О1-АГ неоднорідний і складається з трьох субодиниць: А, В, С, за якими розрізняють серовар АВ - Огава. АС - Інаба і АВС - Гікошіма. Ці властивості є епідеміологічними маркерами даних збудників.

Представники серогрупи О139 НЕ агглютинируются О1-сироватками. Даний випадок стався від биовара Ель-Тор.

Його виникнення обумовлено генетичними механізмами. В результаті рекомбінації збудник придбав групу генів, що кодують новий варіант ЛПС клітинної стінки спільно з полисахаридом капсули.

Значні зміни в будові поверхневих АГ забезпечили «ускользание» бактерій серогрупи О139 від дії факторів імунітету, спрямованих до інших збудників холери.

Інші вібріони, які також не агглютинируются О1-сироваткою, позначаються як НАГ-вібріони (або неагглютінірующіеся). Вони здатні викликати самостійні діарейні захворювання.

Збудник містить численні адгезини і фактори колонізації. До них відносяться гемаглютинін і різні види пілей.

Екзополісахариди вібріонів виконує захисну функцію і забезпечує утворення біоплівки.

Основну роль в патогенезі холери відіграє екзотоксин (або холероген) - термолабільних білок, стійкий до дії протеолітичних ферментів, руйнується фенолом і формаліном. За механізмом дії є ентеротоксин.

Молекула екзотоксину складається з 2 компонентів (А і В) загальною молекулярною масою 84 кД.

Рецепторний компонент В має 5 субодиниць. Він взаємодіє з GМ1 -гангліозідним рецептором на ентероцитах і забезпечує проникнення в клітину токсичного компонента А. В клітці відбувається відновлення компонента А з утворенням субодиниці А1. яка каталізує рібозілірованіе клітинного G-білка.

В результаті активується аденилатциклаза, і відбувається підвищення рівня цАМФ в ентероцитах. Це призводить до активної секреції іонів хлору і бікарбонату, придушення всмоктування іонів натрію, хлору і води, виходу рідини і електролітів з залізистих клітин в просвіт кишечника з розвитком важкої діареї.

Освіта токсину визначається ctx-генами трансдуцірующего CTX # 966; -бактеріофага. Попадання фага CTX # 966; в холерний вібріон і його інтеграція в геном призводять до лізогенной конверсії збудника, і вібріон отримує здатність до синтезу холерного токсину.

Однак успішна трансдукция фага в бактерії можлива тільки при наявності у вібріонів особливих рецепторних пілей. Вони здатні специфічно зв'язувати CTX-фаг, забезпечуючи його проникнення в клітину.

Рецепторні пили кодуються генами окремого генетичного острівця патогенності VPI. Передбачається, що даний острівець патогенності потрапляє в холерний вібріон в результаті трансдукції ще одного специфічного фага VPI # 966; .

Ферменти агресії і інвазії гиалуронидаза та нейрамінідази розріджують слиз, полегшують доступ бактерій до епітелію, забезпечують взаємодію з микроворсинками.

Полісахарид капсули бактерій серогрупи О139 захищає від фагоцитозу і оберігає від дії АТ і комплементу.

Холерні вібріони стійкі до низьких температур - в льоду життєздатні до 1 місяця. У морській воді зберігаються до 1,5-2 місяців, у річковій - до декількох тижнів, в грунті - до 3 місяців, у фекаліях - до 3 діб. У варених продуктах, молоці і молочних продуктах, сирих овочах життєздатні 2-5 днів, на фруктах - 1-2 дня.

Вібріони мають слабку резистентністю до дії підвищеної температури. При 80 ° С гинуть через 5 хв, при 100 ° С - миттєво. Холерні вібріони високочутливі до висушування, ультрафіолетового опромінення, хлоровмісних препаратів; всі вібріони високочутливі до кислот.