Камери для рахунку формених елементів крові і клітинних елементів
Камера Горяєва - пристосування, призначене для підрахунку кількості клітин в заданому об'ємі рідини. Зазвичай її використовують для визначення числа формених елементів в зразку крові.
Камери складаються з товстого предметного скла з нанесеними на них поперечними прорізами, що утворюють три поперечно розташовані плоскі майданчики.
Середня майданчик поздовжньою прорізом розділена на дві, кожна з яких має вигравірувану на ній сітку. По обидва боки середньої площадки в камері Горяєва розташовані дві інших на 0,1 мм (в камері Фукс-Розенталя на 0,2 мм) вище середньої. Площині цих майданчиків служать для притирання покривного скла до появи так званих Ньютонівських кілець. Після притирання покривного скла створюється камера, закрита з двох бічних сторін, а з двох інших залишаються щілини (капілярні простору), через які і заповнюють камеру.
Принцип сіток один і той же. Вони розділені на ту чи іншу кількість квадратів, різним чином згрупованих.
Постійною величиною у всіх сітках є так званий «малий квадрат», сторона якого дорівнює 1/20 мм, отже, його площа дорівнює 1/400 мм2.
За допомогою камери Горяєва можливо також визначити збільшення мікроскопа.
Зовні являє собою прозорий паралелепіпед (предметне скло), з борознами і нанесеної мікроскопічної сіткою. Розміри малих поділок клітини сітки становлять 0,05 мм, а великих - 0,2 мм. При цьому сітка нанесена на майданчик (ділянка скла), розташований на 0,1 мм нижче, ніж дві сусідні майданчики. Ці майданчики служать для притирання покривного скла. В результаті обсяг рідини над квадратом, утвореним великими розподілами сітки Горяєва, становить 0,004 мікролітра. Підрахувавши кількість клітин над великим квадратом можна підрахувати щільність даного типу клітин в суспензії за формулою:
Кількість клітин / мл = кількість клітин над великим квадратом * 2,5 • 10 ^ 5
Використовуючи камеру Горяєва як своєрідний еталон можна визначити збільшення мікроскопа за формулою:
де kG - це збільшення мікроскопа;
m 1 - положення лівої межі клітини камери Горяєва;
m 2 - положення правої межі клітини або групи клітин;
N - кількість клітин між вимірюваними межами;
a - розмір клітини камери Горяєва (дорівнює 0,05 мм).
Камера Горяєва також використовується для підрахунку кількості клітин в культурі. [1]
Формула для підрахунку кров'яних тілець в камері Горяєва -
x = (а · 400 · в) / б,
де x - шукана кількість формених елементів в 1 мм 3; а - сума формених елементів, полічених в певному обсязі камери; б - кількість полічених малих квадратів; в - розведення крові.
Метод підрахунку ооцист в камері Горяєва.
Цим методом зазвичай користуються при експериментальному зараженні тварин точно встановленої кількості ооцист (тварині вводиться відповідна кількість мілілітрів суспензії). 1 мл суспензії, що містить ооцисти, поміщають в камеру Горяєва. Оскільки обсяг камери Горяєва становить 0,9 м3, кількість підрахованих ооцист множиться на 1111. Отримане число адекватно кількості ооцист в 1 см 3 розчину. Для більш точного визначення розрахунки слід проводити не менше трьох разів, а потім вивести середню арифметичну величину. Потрібне для зараження кількість ооцист відміряють за допомогою градуйованою піпетки. Для більш рівномірного розподілу ооцист в інкубаційному середовищі вміст пробірки необхідно неодноразово струсити.
Підрахунок еритроцитів у камері Горяєва
Принцип. Точна кількість крові рівномірно змішують в певній кількості рідини і поміщають в камеру з відомим об'ємом в якому суспензія крові розподіляється одним шаром. Дно камери розграфлена, завдяки чому можливий точний підрахунок еритроцитів.
Реактиви: 0,9% -ний розчин натрію хлориду.
Спеціальне обладнання: мікроскоп, камера Горяєва, пробірки лабораторні або капіляр від гемометра Салі.
Хід визначення. У суху чисту пробірку вносять 8 мл 0,9% -ного розчину натрію хлориду і капілярної піпеткою 0, 02 мл крові. Попередньо кінчик піпетки витирають, кров видувають на дно пробірки, а піпетку ретельно промивають верхнім шаром рідини. Вміст пробірки добре перемішують. Отримують розведення крові 1. 400, т. Е. Кров розбавляють в 400 разів. При згущенні крові її доцільно розбавити в 500, 600, 700, 800 раз.
Камера і покривне скло повинне бути вимиті і насухо витерті. Покривне скло притирають до камери так, щоб з'явилися райдужні кільця. Беруть краплю розведеної крові з пробірки і заповнюють нею камеру, завдаючи до краю покривного скла Еритроцити підраховують через 1 хв після заповнення камери під малим збільшенням мікроскопа (об'єктив х8, окуляр х10 або х 15) з прикритою діафрагмою або опущеним конденсатором (в затемненому полі зору) .
Еритроцити підраховують в п'яти великих (або 80 малих) квадратах, розташованих по діагоналі. Враховують еритроцити, що лежать всередині малого квадрата, а також на лівій і верхній його стінках. Клітини, що знаходяться на правій і нижній лініях квадрата, не вважають.
Розрахунок: підрахувати число клітин в 80 малих квадратах множать на 20 000 при розведенні крові 1. 400, на 25 000 при розведенні 1. 500 або на 30 000 при розведенні 1. 600 і отримують остаточний результат в мільйонах в 1 мкл. При цьому виходять з того, що обсяг одного малого квадрата дорівнює 1/4000 мкл. Для підрахунку клітин в 1 л кількість еритроцитів в 1 мкл ще множать на 1 000 000.
Примітка. Не допускається дослідження крові зі згустками; підрахунок клітин відразу після заповнення камери (Не чекаючи 1 хв); використання погано вимитих і просушених піпеток і пробірок, недоброякісних реактивів, що викликають гемоліз. При дотриманні всіх правил підрахунку помилка складе в середньому ± 2,5%.