Штам бактерій citrobacter diversus, що володіє комплексом факторів патогенності

Використання: біотехнологія, термолабільних ентеротоксин, ЛТ-ентеротоксин, анатоксин, Citrobacter diversus, вакцина. Сутність ізобетенія: новий штам Citrobacter diversus 930 володіє підвищеною токсінопродуцірующей здатністю. Штам зберігатиметься в колекції ГИСК і має реєстраційний номер 244. штам може бути використаний для отримання термолабільного ентеротоксину і анатоксину при виробництві вакцин. 1 табл.

Винахід відноситься до біотехнології і може бути використано для отримання термолабільного ентеротоксину (ЛТ-ентеротоксину) і анатоксину Citrobacter diversus при виробництві вакцин.

Метою винаходу є штам Citrobacter diversus 930, що володіє підвищеною токсінопродуцірующей здатністю.

Штам Citrobacter diversus ГИСК N 244 характеризується наступними ознаками.

При вирощуванні на звичайних універсальних поживних середовищах при температурі 35-36 o C штам на поверхні живильного середовища зростає з утворенням великих колоній. При вирощуванні в бульйоні Хоттингера (pH 7,2-7,4), температура 35-36 o C, протягом 20 год викликає помутніння з випаданням осаду.

Способи визначення активності ЛТ-ентеротоксину: субплантарное введення мишам вагою 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-40-годинний бульонной культури викликає набряк лапки не менше 120 мг. Аксьонова О.В. 1980; интраназальное введення 0,05 мг 20-40-годинний бульонной культури викликає загибель 95% мишей-самців вагою 15-16 г протягом 20 хв при явищах тонічнихсудом і асфіксії, Войно-Ясенецький Н.К. 1967; внутрішньом'язове введення 300 млн. мікробних клітин 20-годинний бульонной культури викликає некроз шкіри кролика діаметром 3,5 см; в досвіді петля тонкої кишки кролика при введенні 500 млн. м.т. 20-годинний бульонной культури дає позитивний результат (v / l = 1,2); гріти при 56 o C протягом 45 хв центрифугат 20-годинний бульонной культури викликає набряк лапки мишей до 30 мг, не викликаючи некрозу шкіри кролика. Гріти при 100 o C 20-годинна культура не викликає накопичення рідини в ізольованій петлі тонкого кишечника кролика (v / l = 0,3).

Умови зберігання культури після леофільной сушки при вирощеної в 0,3% -ному МПА (pH 7,2-7,4), залитим стерильним вазеліновим маслом, при температурі 4 o C.

Середовища для розмноження бульйон Хоттингера (pH 7,2-7,4), що містить 5% еритроцитів кролика при температурі 35-36 o C протягом 20 год.

Стійкий до пеніциліну, тетрацикліну, лінкоміцину, еритроміцину, левоміцетину, ампіциліну.

Приклад 1. 0,1 мл 1 млрд. Суспензії добової агарового культури в фізіологічному розчині сіють в стерильний бульйон Хоттингера (5 мл pH 7,2-7,4), інкубують в термостаті при 36 o C протягом 20 год, центрифугують при 6000 об / хв протягом 7 хв. Отриману надосадову рідину (центрифугат) в обсязі 0,05 мл вводять субпланарно в задню ліву лапку мишей-самців вагою 15-16 г. Через 24 год тварин умертвляють ефіром і ампутовані по гомілковостопного суглоба зважують на торзіонних вагах, при цьому центрифугат штаму Citrobacyer diversus ГИСК N 244 давав різницю між лівою і правою лапками не менше 120 мл, інші 20 штамів, здатні продукувати ЛТ-ентеротоксин від 65 до 90 мг. Контролі нативний стерильний бульйон Хоттингера (pH 7,2-7,4) і гріти при 56 o C центрифугат 20-годинний бульонной культури 30-35 мг відповідно.

Результати наведені в таблиці.

Приклад 2. 0,1 мл 1 млрд. Суспензії добової агарового культури сіють в бульйон Хоттингера (pH 7,2-7,4), інкубують в термостаті при 36 o C протягом 20 год і 500 млн. М.т. суспензію в обсязі 1 мл вводять в сегмент ізольованою петлі тонкого кишечника кролика. Через 16 год тварин умертвляють повітряної емболією і розраховують співвідношення обсягу ексудату до довжини сегмента (v / l). При цьому 20-годинна бульйонна культура штаму Citrobacyer diversus ГИСК N 244 виявилася здатною давати накопичення рідини у великій кількості, і показник v / l склав 1,2. У решти 20 штамів, здатних продукувати ЛТ-ентеротоксин, показник v / l коливався в межах 0,9-1,0. При введенні стерильного бульйону Хоттингера і грітися при 100 o C 20-годинний бульонной культури відношення обсягу накопиченої рідини до довжини сегмента склало 0,25 і 0,3 відповідно.

Штам бактерій Citrobacter diversus ГИСК N 244, що володіє комплексом факторів патогенності.