Серодиагностика і ретроспективна діагностика - студопедія

Ретроспективна діагностика з метою визначення типу і варіанта ВЯ, що викликав в минулому захворювання тварин, заснована на ідентифікації AT в РПСК, РДП і РРІД, НРІФ, реакції серозащіти на мишенята і РН в культурі клітин.

Для достовірного виявлення AT і визначення їх типовий специфічності проби Сивоя-Ротко крові повинні бути взяті не раніше 7 дн з моменту появи у тварин ознак везикулярного захворювання або проведення вакцинації. На дослідження слід направ-лять 5-10 проб сироватки від кожної вікової групи. На партію проб сироватки, на-правляться для дослідження, оформляють супровідний документ.

Виявлення, ідентифікація типової специфічності і кількісне визначення AT до ВЯ в РРІД, РПСК, РНСК і Ніф можуть проводитися в умовах звичайних ветеринарно-діагностичних лабораторій і не вимагає створення більш суворого санітарного режиму, оскільки проводяться з неінфекційними матеріалами.

Для виявлення інгібіторних (неповних) AT застосовують РНСК. Ці AT відрізняються високою авідності. Вони формують комплекс АГ-АТ, які не адсорбує комплемент. Зв'язуючись з АГ швидше повних AT, вони блокують його, але не пов'язаний при цьому комплемент у присутності гемолітичної сироватки викликає лізис еритроцитів. Інгібіторні AT виявлені зараз при багатьох інфекціях, в тому числі при яшуре. Дан-ва реакція застосовується для визначення типів ВЯ по сироватка перехворілих живіт-них, а також для виявлення постінфекційних і поствакцинальних AT.

Типування ВЯ по сироватка перехворілих тварин в РДП. В реакції ис-товують: АГ з очищеного і концентрованого лапінізірованного ВЯ типів О, А, С та ін .; сироватки від перехворілих на ящур тварин (не придатні для дослідження в РДП сироватки крові тварин, двічі перехворіли ВЯ різних типів), типоспецифичен-ські сироватки; агарового середовища.

Постановка реакції: в центральні лунки 7-ми 6-вугільних систем на агарових пла-Стінка поміщають відповідні АГ типів О, А, С та ін. В периферичні лунки поміщають проби випробовуваних і контрольних сироваток. Потім пластинки витримують у вологій камері при 37 ° С. Реакцію враховують через 16, 24, 48 і 72 годин після постановки. Позитивна реакція характеризується утворенням однієї або двох чітких ліній пре-ціпітаціі між лункою з АГ і сироваткою. ВЯ відносять до того типу, з АГ якого досл-туемая сироватка дає позитивну реакцію. У разі виявлення в сироватках преципитирующих AT до 2 і більше типів вірус відносять до того типу, з АГ якого досліджувані сироватки дають найбільший відсоток позитивних реакцій.

РРІД. Сутність її полягає в формуванні зони специфічної преципітації вірусних антигенів антитілами, включеними до складу агарового гелю. Реакція є тіпоспеціфічной, дозволяє провести дослідження по типування і кількісному визначенню постінфекційних і поствакцинальних AT.

Компоненти реакції: 1) антигени еталонні 7 типів ВЯ і інших везикулярний болез-ній (ВПС 0-72 і Т-75, БЕС А-48 і С-72, ВС Індіана і Нью-Джерсі); 2) сироватки еталон-ні 7 типів ВЯ і інших везикулярний хвороб (ВПС 0-72 і Т-75, БЕС А-48 і С-72, ВС Індіана і Нью-Джерсі); 3) агар білий або імпортний фірм "Серва" або "Діфко", азид натрію або кислота карболова, вода дистильована, БФР з рН 7,2-7,4. AT, виявлений-ні в випробуваної пробі сироватки, відносять до того серотипу, з АГ якого вони дали поло-тивних реакцію. Їх граничним титром вважають максимальне розведення досліджуваної сироватки, з яким спостерігається позитивна реакція. Титри сироватки, отримані від вакцинованих тварин, залежать від активності використаної вакцини, кратності і термінів її застосування і фізіологічних характеристик тваринного (вік, вид). У 1-кратно вакцинованого проти ящуру дорослого ВРХ зазвичай титри через 30-90 днів після введення вакцини знаходяться в діапазоні 1: 20-1: 80, а після 2-кратної імунізації в ці ж терміни титр зростає до 1: 80-1: 160 . Титр у молодняка, як правило, в 2-3 рази нижче, ніж у дорослих тварин. У свиней і овець титри нижче, ніж у ВРХ. Після того, що хворіє тварин титри значно вище, ніж після вакцинації, і зазвичай перевищують 1: 160.

Зустрічний ІЕФ. Може бути з успіхом використаний для серотипування ВЯ. Чувст-вітельность його така ж, як і РДП, але облік результатів проводиться через 1,5 год, тоді як реакція імунодифузії вимагає не менше 24 год.

Ніф. При ящуре дозволяє проводити диференціацію AT перехворілих тварин від вакцинованих. Виявлення в Ніф специфічного світіння свідчить про наявність в випробуваної сироватці постінфекці-ційних антитіл, тобто про переболевания тваринного ящуром.

За допомогою РНГА визначають напруженість поствакцинального імунітету у ВРХ. Встановлено кореляцію результатів, отриманих при РПГА і РН. За допомогою монАТ в РН або ELISA визначають не нейтралізуемой варіанти ВЯ. Залежно від чутливо-сти до монАТ всі варіанти ВЯ розділені на 3 групи. Варіанти 1-ї групи мали мутації переважно в області 140-160 VP1; варіанти 2-й і 3-ї груп мутують в області 204 VPI і 70, 139, 195 VP3 відповідно. Визначено дві великі АГ зони вірусу: чутливих-кові і нечутлива до трипсину (VP1 140-160 і VP3 відповідно).

Реакція серозащіти на мишенята-сосунов. Використовується для визначення типу ВЯ по сироватка тварин-реконвалесцентів. Для постановки реакції використовують еталонні (адаптовані до організму 4-7-дн мишенят-сосунов) штами БЯ різних типів. Шгам-ми повинні бути типоспецифічними і мати титр на мишенята-сосунов не нижче 7 lg в 1 м

ВЯ, що викликав захворювання тварин, відносять до того типу, при зараженні яким щеплені сироваткою мишенята залишилися живі. Необхідною умовою достовірної оцінки реакції серозащіти є обов'язкова загибель контрольних мишенят, яким введено вірус, в той час як контрольні мишенята, яким вводили тільки випробувану сиворот-ку, повинні вижити.

РН в культурі клітин. Для постановки РН необхідно мати 24 пробірки культур клітин. Відсутність ЦПД в пробірках, в які внесено суміш вірусу з сироваткою, при чітко вираженому ЦЛД в контрольньгх пробірках, вказує на наявність в досліджуваній сироватці AT проти даного типу ВЯ. Специфічність ЦПД можна встановити шляхом ис-проходження в РСК культуральної рідини, отриманої з пробірок з вираженим ЦПД.

Диференціальна діагностика. При диференціальної діагностики ящуру необ-обхідно виключити ВС, ВЕС, БЕС, катаральну лихоманку овець. Для диференціальної ді-агностики в лабораторіях використовують діагностичні набори, що випускаються биологиче-ської промисловістю, для яшура і ВБС.

Іноді в матеріалі від людей, підозрюваних в захворюванні ящуром, виділяли возбу-дителя ентеровірусноі інфекції людини - вірус Коксакі серотипу В. Вірус викликав ві-дімое ЦПД в перещеплюваних культурах клітин протягом 24 год, маючи ікосаедрічеськая форму, розміром 20-30 нм і викликав загибель мишенят при інтрацеребральному зараженні.