Реакція аглютинації - студопедія

Безпосередньо - прямо наступний без чого-небудь, без подальших ланок.

Опосередковано - через інші клітини, що не прямо.

ЗНИЖУВАТИ ≠ ЗБІЛЬШУВАТИ (активність клітин).

Відторгнутих - не прийняти, відкинути. Організм відкинув трансплантований орган.

Реакції імунітету - це реакції специфічної взаємодії (зв'язування) антигену і антитіла або антигену і сенсибилизированного Т-лімфоцити.

Ці реакції протікають in vitro (у пробірці) і in vivo (в живому організмі).

У цих реакціях бере участь сироватка (serum), тому вони називаються серологічними.

Реакції імунітету використовуються для діагностики інфекційних захворювань. При цьому невідомий компонент визначається за відомим компоненту, що засноване на специфічності взаємодії антигена з антитілом. Якщо відомо антитіло. то можна виявити (виявити) невідомий антиген. Якщо ж відомий антиген. то по ньому можна виявити невідомі антитіла.

Таким чином, реакції імунітету використовуються:

1) для серологічної діагностики (серодиагностики) захворювань - виявлення в сироватці крові хворих людей антитіл до певного збудника інфекційного захворювання (відомому антигену); якщо в сироватці крові хворої людини присутні антитіла до якого-небудь збудника, то саме цей збудник і викликав дане інфекційне захворювання;

2) для серологічної ідентифікації (сероідентіфікаціі) мікробів - для встановлення виду збудника захворювання за допомогою імунних діагностичних сироваток (відомих антитіл); якщо антитіла пов'язують збудника, виділеного від хворої людини, то цей мікроб ідентичний тому, яким імунізували тваринного при отриманні імунної діагностичної сироватки.

Реакції імунітету протікають в 2 фази:

1) специфічна фаза - з'єднання активного центру антитіла з детерминантной групою антигену з утворенням комплексів антиген-антитіло; ця фаза протікає швидко, але немає видимого ефекту;

2) неспецифічна фаза - поява видимого ефекту взаємодії антигену і антитіла - випадання осаду (аглютинація) або помутніння (преципитация), що дозволяє побачити утворення комплексів антиген-антитіло і зробити висновок про відповідність антигену і антитіла один одному.

До реакцій імунітету відносяться реакція аглютинації (РА), реакція преципітації (РП), реакція зв'язування комплементу (РСК).

Реакція аглютинації - це склеювання і випадання в осад мікробних або інших клітин (еритроцитів) під дією антитіл в присутності електроліту. Відомий ефект реакції (феномен аглютинації) - утворення осаду, який називається агглютінати.

Цю реакцію використовують для серодиагностики і сероідентіфікаціі. РА використовують для серодиагностики (виявлення антитіл в сироватці крові хворих) черевного тифу і паратифів (реакція Відаля), бруцельозу (реакція Райта), туляремії та лептоспірозу. РА використовують для сероідентіфікаціі (визначення виду збудника, виділеного від хворого) при кишкових інфекціях, кашлюку, холері та ін.

1. Антиген (агглютиноген) - це цілі (не руйнування) мікробні або інші клітини (корпускулярний. Нерозчинний антиген). Агглютіногени - це суспензія живих або убитих мікробних клітин або інших будь-яких клітин. Антигени можуть бути як невідомими, так і відомими. Невідомий агглютиноген - це мікробна культура, виділена з організму хворого, яку необхідно визначити. Відомий антиген - діагностикум - діагностичний препарат - суспензія вбитих мікробів відомого виду в фізіологічному розчині. Ця суспензія каламутна (непрозора), тому що мікробні клітини не розчиняються, а залишаються цілими. Відомий агглютиноген буде використовуватися для виявлення невідомих антитіл в сироватці крові хворих.

2. Антитіло (агглютинин) - знаходиться в сироватці крові. Антитіла також можуть бути як невідомими, так і відомими. Невідомі антитіла, які потрібно визначити, знаходяться в сироватці крові хворої людини. Відомі антитіла знаходяться в імунних діагностичних сироватках. які називаються аглютинативна сироватками. Вони використовуються для сероідентіфікаціі, тобто для визначення невідомого антигена - виду мікробної культури.

3. Електроліт - 0,9% розчин хлориду натрію.

Вирощену на скошеному агарі чисту культуру збудника відомого виду (наприклад, збудника черевного тифу) змивають 3-4 мл ізотонічного розчину, поміщають в стерильну пробірку, будь-яким способом вбивають мікроби (наприклад, шляхом кип'ятіння і визначають густоту (повинно бути 3 млрд. Мікробних клітин в 1 мл). якщо мікробні клітини вбивають високою температурою, то отримують О-діагностикум (О-антиген), якщо ж її обробляють формаліном, то отримують Н-діагностикум (Н-антиген).

Приклади діагностикумів. сальмонельозний діагностикумів, бруцеллезний диагностикум, туляремійний діагностикумів.

Отримання агглютинирующих сироваток.

Тваринам (частіше кроликам) 5 - 7 разів через проміжки часу парентерально вводять в зростаючих дозах мікробні діагностикуми (проводять гипериммунизации). а потім у них відбирають сироватку крові, в якій містяться антитіла до тих мікробів, з яких приготовлений діагностикумів. Якщо імунізацію проводять О-діагностикумом, то отримують О-агглютинирующие сироватки (містять О-антитіла), якщо Н-діагностикумів - Н-агглютинирующие сироватки.

Агглютинирующие сироватки можуть бути неадсорбованими або нативними і адсорбованими.

Неадсорбованими сироватки містять групові антитіла до декількох близькоспоріднених видів мікробів.

Адсорбовані сироватки містять антитіла до одного або декількох антигенів одного виду мікроба. Якщо сироватки містять антитіла тільки до одного антигену, вони називаються монорецепторними або моновалентною, якщо до кількохантигенів - груповими адсорбованими сироватками.

Приклади агглютинирующих сироваток: сальмонельозна монорецепторная Н-агглютинируют сироватка, сальмонельозна групова адсорбована О-агглютинируют сироватка, протихолерні О-агглютинируют сироватка та ін.

Титр агглютинируют сироватки - найбільше розведення сироватки, при якому ще виявляється реакція аглютинації з антигеном (титр залежить від кількості антитіл в крові: чим більше антитіл, тим вище титр сироватки).

Способи постановки РА.

1. Орієнтовна (пластинчаста) РА - проводиться на склі. На предметне скло наносять 2 краплі сироватки і 1 краплю ізотонічного розчину. В одну з крапель сироватки і в краплю ізотонічного розчину петлею вносять мікробну культуру і перемішують. Крапля ізотонічного розчину з мікробами - контроль антигену. крапля сироватки без мікробів - контроль антитіла. крапля сироватки з мікробами - досвід. Якщо в сироватці є антитіла, відповідні мікробним антигенів, які з нею поєднуються, то антитіла і антигени будуть специфічно зв'язуватися один з одним і через 1 - 3 хв у дослідній краплі з'являться пластівці агглютіната. Контроль антигена повинен бути мутним, а контроль антитіла - прозорим. Облік результатів реакції проводиться по появі пластівців агглютіната. Якщо випадають пластівці - реакція позитивна, тобто антиген відповідає антитілу і по антигену можна визначити антитіло або навпаки. Якщо залишається помутніння - реакція негативна.

2. Розгорнута реакція аглютинації - проводиться в пробірках. Спочатку готують 2-разового розведення сироватки крові хворої людини від 1:50 до 1 1600. У 6 пробірок наливають по 1 мл ізотонічного розчину хлориду натрію. В першу пробірку вносять 1 мл сироватки крові хворого в розведенні 1:50, перемішують і отримують розведення 1: 100, потім 1 мл розведення 1: 100 переносять у другу пробірку і отримують розведення 1: 200 і т.д. Дві пробірки залишають для контролю антигену та сироватки. У контроль сироватки додають тільки сироватку в розведенні 1:50, в контроль антигену - тільки антиген. У всі інші пробірки додають 0,1 мл антигену - діагностикумів (О або Н) і ставлять все пробірки в термостат при 37 ° С на 18-20 годин. Облік результатів реакції проводять за характером, кількістю утвореного осаду (агглютіната) і ступеня каламутності. Облік проводять тільки при наступних результатах в контролях: контроль сироватки - прозорий, контроль антигену - каламутний. О-антитіла дають дрібнозернистий осад. Н-антитіла - крупнозернистий. За останньою пробірці, в якій ще видно реакція аглютинації, встановлюють діагностичний титр.

При серодіагностики захворювань важливо не просто виявити специфічні антитіла до певного збудника, але і виявити їх кількість, тобто встановити такий титр антитіл, до оли можна говорити про наявність захворювання, викликаного цим збудником. Цей титр і називається діагностичним титром. Наприклад, для діагностики черевного тифу потрібно виявити титр антитіл - 1: 400, але не менше. Ще більш точні результати дає виявлення наростання антитіл в парних сироватках. Сироватку хворого відбирають на початку захворювання і через 3 - 5 або більше днів. Якщо титр антитіл зростає не менше, ніж в 4 рази, отже, можна говорити про поточний захворюванні.

Якщо розгорнута реакція аглютинації ставиться для сероідентіфікаціі, то використовують агглютинирующие діагностичні сироватки, розведені до титру або до половини їх титру. РА вважається позитивною, якщо аглютинація виявляється в розведенні, близькому до титру діагностичної сироватки.