Лабораторна діагностика стафілококових інфекцій - студопедія

Методи мікробіологічної діагностики стафілококових забо-вань відображені в схемі 1. Виконується наступний комплекс методів дослідження.

Бактеріоскопічний метод - мікроскопія мазків з матеріалу від хворого, забарвлених по Граму. Виявлення в мазках коків, що розташовуються невеликими групами по 2-3 бактерії; типове розташування у вигляді грон винограду характерно для чистих культур стафілокока (рис. 1 - кольорова вкладка).

Бактеріологічний метод. Ісследуемийматеріал засівають на чашки з желточно-сольовим (ЖСА) і кров'яним МПА, інкубують при 37 0 С добу. На 2 день враховують характер

зростання колоній на обох середовищах. На желточно-сольовому агарі колонії стафило-кока мають рівні краї, гладку поверхню, навколо колонії утворюється райдужний віночок в результаті розщеплення лецитину яєчного жовтка ферментом лецітовітеллазой; колір пігменту колоній варіює від золотистого до білого. На кров'яному МПА навколо колоній утворюються зони

гемолізу. З типових для стафілокока колоній роблять мазок, фарбують його за Грамом, микроскопируют. Частину колонії пересівають на скошений МПА для отримання чистої культури. На 3 день проводять ідентифікацію виділеної культури стафілокока з диференціацією основних видів відповідно до таблиці 2, визначають чутливість до антибіотиків методом паперових дисків і фаговар (набір для фаготипирования складається з фагів 21 типу, розділених на 4 групи; при внутрішньолікарняних інфекціях найбільш часто зустрічаються фаговари 77 і 80).

Таблиця 1.Етіологія бактеріальних ранових і гнійно-запальних інфекцій

Грампозитивні бактерії Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Erysipelotrix rhusiopathiae Грам-негативні бактерії Burkholderia cepacia, Citrobacter koseri, Edwardsiella tarda, Eikenella corrodens, Enterobacter spp, Escherichia coli , Haemophylus influence, Klebsiella spp, Listeria monocytogenes, Moraxella catarrhalis, Proteus spp, Pseudomonas spp, Salmonella enterica, Serratia spp, Spirillum minus, Streptobacillus moniliformis, Vibrio vulnificus

Неспороутворюючих грампозитивні бактерії Bacteroides spp, Prevotella spp, Porphiromonas spp, Fusobacterium spp, Veilonella spp Неспороутворюючих грамнегативнібактерії Peptostreptococcus spp, Propionibacterium spp Cпорообразующіе грампозитивні бактерії Clostridium perfringens, Clostridium novy, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, Clostridium sordelli, Clostridium histolyticum, Clostridium sporogenes, Clostridium ramosum

Схема 1. Лабораторна діагностика стафілококових інфекцій

Матеріал: гній, ранові відокремлюване, пунктати з порожнин і абсцесів, кров, харкотиння, сеча, ліквор, блювотні маси, випорожнення, залишки їжі.

Мікроскопічний метод Виявлення грампозитивнихкоків (групами по 2-3 клітини) в мазках з матеріалу від хворого, забарвлених по Граму Серологічний метод РНГА або РН для визначення # 945; -антітоксіна в сироватці крові хворих на хронічні стафілококових інфекціями. ІФА для визначення антитіл до стафілококу. Має допоміжне значення Бактеріологічний метод 1 день. Посів матеріалу на чашки з желточно-сольовим (ЖСА), кров'яним МПА, цукровим МПБ. 2 день-облік характеру росту колоній. На ЖСА колонії стафило-кока з рівними краями, гладкою поверхнею, райдужним віночком навколо, колір - від золотистого до білого.

На кров'яному МПА - зони гемолізу, в МПБ рівномірне помутніння. В мазку з колоній в забарвленні по Граму - коки у вигляді грон винограду. Пересівши решти колонії на скошений МПА для отримання чистої культури, а з цукрового МПБ на кров'яний МПА і ЖСА для отримання ізольованих колоній. 3 день - ідентифікація виділеної культури стафілокока, диференціація видів за біохімічними властивостями, визначення чутливості до антибіотиків і фаговаров. Виділення чистої культури з ЖСА і кров'яного МПА. 4 день.Заключеніе про вид стафілокока. Ідентифікація культури, виділеної з цукрового МПБ 5 день.Заключеніе про вид стафілокока, виділеного з цукрового МПБ.

Таблиця 2. Диференціація основних видів стафілокока

Позначення: (+) - наявність ознаки; (-) - відсутність ознаки; S - чутливий; R - резистентний.

Для виявлення плазмокоагулази цитратную плазму крові кролика розводять в 2 рази, розливають по 0,4 мл в пробірки, куди вносять петлею культуру стафілококів. Резуль-тати реєструють через 2, 4, 24 години. При наявності плазмокоагулази об-разуется згусток.

У деяких випадках у виділених чистих культур стафілокока визначають наявність ДНК-ази, каталази, лизоцимной активності, фибринолизина, гіалуронідази.

Лизоцимная активність виявляють по зонам просвітління навколо колоній стафілокока при його посіві на МПА в чашках Петрі з культурою Micrococcus luteus.

Визначення ДНК-ази. Добову агарове культуру стафілокока засівають на МПА в чашці Петрі, що містить ДНК. Після інкубації посівів при температурі 37 0 С протягом 18-24 годин поверхню МПА заливають 1 N розчином соляної кислоти. Наявність ДНК-ази характеризується появою зони просвітління навколо колоній.

Каталазна тест. Чисту культуру стафілокока вносять в краплю 3% -10% -го розчину перекису водню на склі і розтирають круговими дві-жениями. При наявності каталази перекис водню розкладається з образо-ням бульбашок кисню.

Cерологіческій метод в діагностиці стафілококових інфекцій має допоміжне значення, используясь, в основному, для діагностики хронічних процесів (остеомієліт, септикопиемия і ін.). Для визначення антитіл до токсину стафілокока застосовують РНГА з еритроцитарних діагностикумів, навантаженим # 945; -токсіном стафілокока або РН (реакція нейтралізації гемолітичної активності стафилококкового токсину антитоксинами сироватки крові хворого в присутності еритроцитів кролика). У здорових осіб титр стафилококкового антитоксина становить 0,5-4 АЕ. Розроблено також ІФА.

Клінічно значущі види стафілокока коагулазопозитивними: S. aureus, S. hyicus коагулазоотріцательних: S. epidermidis, S. saprophyticus, S. haemolyticus, S.hominis