Лабораторна діагностика ботулізму - студопедія

Ботулізм - гостра харчова інтоксикація, що протікає з переважним ураженням центральної і вегетативної нерв-ної системи ботулінічний токсин - силь-нейшим біологічним отрутою, що виробляється паличкою ботулізму (Clostridium botulinum) і відноситься до особливо небезпечних патогенних біологічних агентів. Ботулізм може бути пов'язаний також з вегетацією збудника в рані або кишечнику.

Матеріалом для дослідження є кров, сеча, випорожнення, промивні води шлунка, залишки їжі (м'ясні, рибні, фруктові, овочеві, грибні консерви, ковбаси та ін.). Зазвичай у хворого з підозрою на ботулізм досліджують на наявність токсину кров, а на наявність збудника - випорожнення.

Біопроба. Проводиться реакція нейтралізації на білих мишах з метою виявлення ботулотоксину в досліджуваному матеріалі. Виявлення токсину палички ботулізму і його типу має важливе значення для призначення пацієнту антитоксической протівоботуліністіческой сироватки - єдиний-ного ефективного засобу специфічної терапії та екстреної профі-лактики ботулізму. Реакцію ставлять з сумішшю антитоксических протівоботуліністіческіх сироваток, а також з моновалентною сироватками типів А, В, Е. При наявності в досліджуваному матеріалі ботулотоксінамиші контрольної групи гинуть з явищами паралічів (парез кінцівок, осина талія і т.д.). При нейтралізації токсину антитоксической сироваткою миші залишаються живими.

Експрес-діагностика ботулізму проводиться за допомогою РНГА з анти еритроцитарних діагностикумами для виявлення ботулотоксину в досліджуваному матеріалі.

Бактеріологічний метод. Досліджуваний матеріал засідан-ють в 4 флакона з середовищем Кітт -Тароцці; один флакон прогрі-ють при температурі 60 0 С протягом 15 хв (для селекції С. botulinum типу Е), інший - при 80 0 С протягом 20 хв. Накопичення куль-тур клостридий ботулізму типів Е і F відбувається при 28 ° С, а клостридий типу А і В - при 35 ° С протягом 48 год. Для активації токсину Е до живильному середовищі додають трипсин.

Через 24 - 48 год інкубування враховують характер росту посівів (помутніння і газоутворення), готують мазки в забарвленні по Граму. При наявності типових бактерій у вигляді «тенісних ракеток» зі спорами (рис.15) роблять пересів на кров'яний цукровий МПА, на якому С. botulinum утворює колонії неправильної форми з гладкою або шорсткою поверхнею і зоною гемолізу. В глибині стовпчика цукрового МПА колонії палички ботулізму мають вигляд пушинок або чечевичек.

Мал. 15. Паличка ботулізму - Clostridium botulinum. Забарвлення по Граму. Грампозитивні спороутворюючі палички у вигляді «тенісної» ракетки. х900

Ідентифікація чистої культури проводиться на підставі вивчення біохімічних властивостей (посів у сере-ди «строкатого» ряду), вивчають інші диференціальні призна-ки (див. Табл.). Антигенні властивості культури вивчають за допомогою РА з типовими сироватками. Виявлено-ють також ботулінічний токсин в фільтраті бульонной культури і його тип за допомогою реакції нейтралізації на білих мишах.