Бактеріологічний метод дослідження
бактеріологічний метод
Бактеріологічний метод полягає у виділенні чистої культури збудника (популяції, що містить бактерії одного виду) і ідентифікації цього збудника є основним методом бактеріологічного дослідження
Вивчення властивостей мікроорганізмів у бактеріологічній лабораторії з метою встановлення приналежності до тієї чи іншої систематичної групи (виду, роду) і називається їх ідентифікація.
В цілому бактеріологічний метод дослідження є багатоетапний бактеріологічне дослідження, яке триває 18- 24 годин.
Бактеріологічний метод - як проводять?
При бактеріологічному методі в анаеростатах поміщають посіви анаеробів. З аеростата видаляють повітря і замінюють його газовою сумішшю, яка не містить кисень.
Основою бактеріологічного методу є виділення чистої культури збудника, яке відбувається на першому етапі дослідження. Для виділення чистої культури збудника роблять посів взятого матеріалу. Посів робиться, як правило, на щільні поживні середовища, які вибирають виходячи з властивостей передбачуваного збудника.
При бактеріологічному методі застосовують по можливості середовища, на яких росте тільки конкретний вид бактерій - елективні середовища, або середовища, що дозволяють відрізнити передбачуваного збудника від інших мікроорганізмів або по-іншому диференційно-діагностичні середовища.
Наприклад, при бактеріологічної діагностики кишкових інфекцій - середовище Ендо, для виділення дифтерійної палички використовують телуритовий середовища, і т. Д. При виділенні умовно-патогенних мікроорганізмів при бактеріологічному методі посів взятого матеріалу здійснюють на універсальні поживні середовища. Прикладом такого середовища може служити кров'яний агар.
Всі маніпуляції, які пов'язані з виділенням бактеріальних культур, проводяться над полум'ям пальника.
При бактеріологічному методі посів матеріалу на живильні середовища проводять або скляним або металевим шпателем, або бактеріальної петлею таким чином, щоб знаходяться в досліджуваному матеріалі бактерії розсіяти по поверхні живильного середовища. В результаті такого розсіювання кожна бактеріальна клітка потрапляє на свою ділянку середовища.
На другому етапі бактеріологічного методу дослідження проводять вивчення колоній бактерій, які виросли на щільному живильному середовищі і походять від однієї бактеріальної клітини. (Колонія і є чистою культурою збудника). Проводять мікроскопічне і макроскопічне дослідження колоній в відбитому та прохідному світлі: неозброєним оком, під малим збільшенням мікроскопа, за допомогою лупи.
Відзначають культуральні властивості колоній: їх форму, величину, колір, характер країв і поверхні, структуру, консистенцію. Далі для приготування мазків використовують частину кожної з намічених колоній. Фарбують мазки за Грамом, микроскопируют, визначаючи тинкторіальних (відношення до фарбування) і морфологічні властивості виділеної культури і перевіряючи одночасно її чистоту.
Частину колонії пересівають в пробірки з оптимальною для даного виду середовищем, наприклад, скошеним агаром, з метою накопичення чистої культури для більш повного її вивчення. Пробірки переміщують на 18-24 години в термостат. На другому етапі, крім перерахованих досліджень, нерідко підраховують кількість колоній, що виросли.
Це має особливе значення при захворюваннях, викликаних умовно-патогенними мікроорганізмами. При таких захворюваннях судити про провідну роль якого-небудь збудника допустимо лише за його змістом в патологічному матеріалі в досить великій кількості і переважанню цього збудника над іншою флорою.
Ідентифікація виділеної чистої культури збудника і визначення для цієї культури чутливості до антибіотиків та інших хіміотерапевтичних препаратів - третій етап бактеріологічестого методу. Ідентифікацію виділеної бактеріальної культури виробляють по тинкторіальними, морфологічним, біохімічним, культуральним, токсигениих, антигенними властивостями.
Насамперед беруть мазок з культури, що виросла на скошеному агарі, досліджують морфологію бактерій і перевіряють чистоту культури виросли бактерій. Далі здійснюють посів виділеної чистої культури бактерій на середовища Гіссен. Бажано провести посів і на інші середовища для визначення біохімічних властивостей.
Ферментативні, або біохімічні, властивості бактерій обумовлені ферментами, які беруть участь у розщепленні білків, вуглеводів, що викликають відновлення і окислення різних субстратів.
Причому кожен з видів бактерій виробляє постійний для нього набір ферментів. Найчастіше при вивченні антигенних властивостей використовують реакцію аглютинації на склі.
За допомогою реакції нейтралізації токсину антитоксином in vivo або in vitro визначають токсінообразованіе мікробів. У ряді випадків вивчають і інші фактори вірулентності. Перераховані вище дослідження, які проводяться в бактеріологічній лабораторії, дозволяють визначити рід або вид збудника.
У тому числі для виявлення джерела інфекції, з метою виявлення епідемічної ланцюжка захворювання, здійснюють внутрішньовидову ідентифікацію бактерій. Суть внутрішньовидової ідентифікації бактерій полягає у визначенні фаговаров або фаготип, вивченні різних властивостей виділених антигенних бактерій. Процес визначення фаготип називають фаготіпірованіе. Фаготіпірованіе здійснюють при черевному тифі, стафілококової інфекції, паратифе В.
На чашку з живильним середовищем, яка засіяна за допомогою шпателя виділеної чистої культурою, наносять різні діагностичні фаги по краплині. У разі, якщо культура чутлива до даного фагу, в результаті бактеріологічного дослідження спостерігаються так звані негативні колонії (бляшки), які виглядають як утворення округлої форми ділянок зруйнованих бактерій. Культура збудника може бути чутлива до кількох чи одного фагів.
У зв'язку з широким розповсюдженням лікарсько-стійких форм бактерій, для призначення раціональної хіміотерапії необхідно визначення антибіотикограми - стійкості або чутливості до хіміотерапевтичних препаратів виділеної чистої культури збудника. Для антибіотикограми використовують або метод паперових дисків, або найбільш точний, але громіздкий метод серійних розведень.
Метод паперових дисків базується на виявленні зони придушення розмноження бактерій навколо дисків, які просочені антибіотиками. У разі застосування методу серійних розведень хімічний препарат - антибіотик з рідким живильним середовищем розводять в пробірках, після чого засівають в пробірки однакову кількість бактерій. За відсутності або наявності росту бактерій проводять облік результатів. В результаті бактеріологічного методу дослідження для визначення ідентичності штамів, отримана антибіотикограмою може служити і епідеміологічним цілям.
Можуть проводитися повторні дослідження при виявленні бактерионосительства т. К. Можна не виявити збудника в одній порції матеріалу.
В даний час в сучасному світі існують прискорені методи визначення виду і роду бактерій. Так, вУкаіни застосовують систему індикаторних папірців - СІБ, що дозволяє через 6-12 годин і без використання великої кількості поживних середовищ виділити чисту бактеріальну культуру. Також широко використовують імунофлюоресцентний метод для експрес-діагностики інфекційних хвороб (див. Серологічні дослідження).
Бактеріологічне дослідження - сукупність методів, які застосовують дл.